Статья

СПОСОБ АНАЛИЗА АКТИВАЦИОННОГО СТАТУСА И ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА CD8+ И NK-КЛЕТОК ИММУННОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ ОПУХОЛЕЙ ГИПОФИЗА ПРИ ПОМОЩИ МНОГОПАРАМЕТРИЧЕСКОЙ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ

Логинова, М.Ю., Мазеева, В.В., Захарова, Е.Н., Лисина, Д.В., Григорьев, А.Ю., Ш. Shutova, A.S., Пигарова, Е.А., Дзеранова, Л.К., Минниахметов, И.Р., Мельниченко, Г.А., Мокрышева, Н.Г.
2025

Настоящее изобретение относится к способу анализа активационного статуса и цитотоксического потенциала CD8+ Т-клеток и NK-клеток иммунного микроокружения нейроэндокринных опухолей гипофиза при помощи многопараметрической проточной цитометрии, заключающемуся в том, что из послеоперационного материала аденомы гипофиза получают суспензию единичных клеток с помощью механического растирания и ферментативной обработки раствором с помощью коллагеназы II в HBSS + 10% FBS, причем агрегаты клеток на этапе пробоподготовки удаляют пропусканием клеточной суспензии через 70 мкм фильтр, а эритроциты удаляют с помощью лизирующего буфера, после чего суспензию единичных клеток окрашивают следующей комбинацией моноклональных антител с флуорохромами: CD38-BV605, CD45-BV650, CD3-FITC, CD16-PECF594, CD56-PE-Cy7, HLA-DR-APC, CD8-APC-H7, затем клетки окрашивают антителами к внутриклеточным Granzyme B-BV421 и PerforinPerCP-Су5,5 и направляют для измерения флуоресцентных сигналов от клеточных антигенов, связавшихся с антителами, с помощью 14-параметрового проточного цитометра, далее проводят анализ, применяя стратегию гейтирования, где сначала исключают из анализа дублеты, субклеточный дебрис и мертвые клетки, выделяя CD45+ лейкоциты, далее оценивают цитотоксический потенциал по секреции Perforin CD8+ Т-клетками и CD16+ и CD56+ NK-клетками с помощью оценки индекса цитотоксичности, для расчета которого все лимфоциты рассматривают на дот плотах CD8-APC-H7/Perforin-PerCP-Cy5.5, CD16-РЕ-CF594/Perforin-PerCP-Cy5.5 и CD56-PECy7/Perforin-PerCP-Cy5.5 соответственно, далее оценивают индексы цитотоксичности по Granzyme В для CD8+ Т-клеток и CD16+ и CD56+ NK-клеток на дот плотах CD8-APC-H7/Granzyme B-BV421, CD16-PE-CF594/Granzyme В-BV421 и CD56-PECy7/Granzyme B-BV421 соответственно, после чего проводят анализ активационного потенциала CD8+ Т-клеток по экспрессии CD38 и HLA-DR среди CD3+ Т-клеток из всех лимфоцитов и отдельно среди CD8+ Т-клеток. Настоящее изобретение обеспечивает создание способа анализа активационного статуса CD8+ Т-клеток и цитотоксического потенциала CD8+ и NKлимфоцитов иммунного микроокружения нейроэндокринных опухолей гипофиза при помощи многопараметрической проточной цитометрии на основе 10-цветной панели антител, где оптимально скомбинированы пары антителофлуорохром и подобраны CD-антигены, обладающие прогностической силой выявления агрессивных и резистентных к терапии аденом. 8 ил., 3 табл., 2 пр.

Логинова, М.Ю., Мазеева, В.В., Захарова, Е.Н., Лисина, Д.В., Григорьев, А.Ю., Ш., Пигарова, Е.А., Дзеранова, Л.К., Минниахметов, И.Р., Мельниченко, Г.А., Мокрышева, Н.Г. СПОСОБ АНАЛИЗА АКТИВАЦИОННОГО СТАТУСА И ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА CD8+ И NK-КЛЕТОК ИММУННОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ ОПУХОЛЕЙ ГИПОФИЗА ПРИ ПОМОЩИ МНОГОПАРАМЕТРИЧЕСКОЙ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ. 2025;
Цитирование