17 Логинова, М.Ю. Мазеева, В.В. Захарова, Е.Н. Лисина, Д.В. Григорьев, А.Ю. Пигарова, Е.А. Дзеранова, Л.К. Минниахметов, И.Р. Мельниченко, Г.А. Мокрышева, Н.Г. 2025 2026-07-01 Настоящее изобретение относится к способу анализа активационного статуса и цитотоксического потенциала CD8+ Т-клеток и NK-клеток иммунного микроокружения нейроэндокринных опухолей гипофиза при помощи многопараметрической проточной цитометрии, заключающемуся в том, что из послеоперационного материала аденомы гипофиза получают суспензию единичных клеток с помощью механического растирания и ферментативной обработки раствором с помощью коллагеназы II в HBSS + 10% FBS, причем агрегаты клеток на этапе пробоподготовки удаляют пропусканием клеточной суспензии через 70 мкм фильтр, а эритроциты удаляют с помощью лизирующего буфера, после чего суспензию единичных клеток окрашивают следующей комбинацией моноклональных антител с флуорохромами: CD38-BV605, CD45-BV650, CD3-FITC, CD16-PECF594, CD56-PE-Cy7, HLA-DR-APC, CD8-APC-H7, затем клетки окрашивают антителами к внутриклеточным Granzyme B-BV421 и PerforinPerCP-Су5,5 и направляют для измерения флуоресцентных сигналов от клеточных антигенов, связавшихся с антителами, с помощью 14-параметрового проточного цитометра, далее проводят анализ, применяя стратегию гейтирования, где сначала исключают из анализа дублеты, субклеточный дебрис и мертвые клетки, выделяя CD45+ лейкоциты, далее оценивают цитотоксический потенциал по секреции Perforin CD8+ Т-клетками и CD16+ и CD56+ NK-клетками с помощью оценки индекса цитотоксичности, для расчета которого все лимфоциты рассматривают на дот плотах CD8-APC-H7/Perforin-PerCP-Cy5.5, CD16-РЕ-CF594/Perforin-PerCP-Cy5.5 и CD56-PECy7/Perforin-PerCP-Cy5.5 соответственно, далее оценивают индексы цитотоксичности по Granzyme В для CD8+ Т-клеток и CD16+ и CD56+ NK-клеток на дот плотах CD8-APC-H7/Granzyme B-BV421, CD16-PE-CF594/Granzyme В-BV421 и CD56-PECy7/Granzyme B-BV421 соответственно, после чего проводят анализ активационного потенциала CD8+ Т-клеток по экспрессии CD38 и HLA-DR среди CD3+ Т-клеток из всех лимфоцитов и отдельно среди CD8+ Т-клеток. Настоящее изобретение обеспечивает создание способа анализа активационного статуса CD8+ Т-клеток и цитотоксического потенциала CD8+ и NKлимфоцитов иммунного микроокружения нейроэндокринных опухолей гипофиза при помощи многопараметрической проточной цитометрии на основе 10-цветной панели антител, где оптимально скомбинированы пары антителофлуорохром и подобраны CD-антигены, обладающие прогностической силой выявления агрессивных и резистентных к терапии аденом. 8 ил., 3 табл., 2 пр. https://repo.bashgmu.ru/publication/5588 https://repo.bashgmu.ru/files/5782