%0 Patent
%A Логинова, М.Ю., 
%A Мазеева, В.В., 
%A Захарова, Е.Н., 
%A Лисина, Д.В., 
%A Григорьев, А.Ю., 
%A Пигарова, Е.А., 
%A Дзеранова, Л.К., 
%A Минниахметов, И.Р., 
%A Мельниченко, Г.А., 
%A Мокрышева, Н.Г., 
%T СПОСОБ АНАЛИЗА АКТИВАЦИОННОГО СТАТУСА И ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА CD8+ И NK-КЛЕТОК ИММУННОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ ОПУХОЛЕЙ ГИПОФИЗА ПРИ ПОМОЩИ МНОГОПАРАМЕТРИЧЕСКОЙ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ
%D 2025
%X Настоящее изобретение относится к способу
анализа активационного статуса и
цитотоксического потенциала CD8+ Т-клеток и
NK-клеток иммунного микроокружения
нейроэндокринных опухолей гипофиза при
помощи многопараметрической проточной
цитометрии, заключающемуся в том, что из
послеоперационного материала аденомы гипофиза получают суспензию единичных клеток
с помощью механического растирания и
ферментативной обработки раствором с
помощью коллагеназы II в HBSS + 10% FBS,
причем агрегаты клеток на этапе
пробоподготовки удаляют пропусканием
клеточной суспензии через 70 мкм фильтр, а
эритроциты удаляют с помощью лизирующего
буфера, после чего суспензию единичных клеток
окрашивают следующей комбинацией
моноклональных антител с флуорохромами:
CD38-BV605, CD45-BV650, CD3-FITC, CD16-PECF594, CD56-PE-Cy7, HLA-DR-APC, CD8-APC-H7,
затем клетки окрашивают антителами к
внутриклеточным Granzyme B-BV421 и PerforinPerCP-Су5,5 и направляют для измерения
флуоресцентных сигналов от клеточных
антигенов, связавшихся с антителами, с помощью
14-параметрового проточного цитометра, далее
проводят анализ, применяя стратегию
гейтирования, где сначала исключают из анализа
дублеты, субклеточный дебрис и мертвые клетки,
выделяя CD45+ лейкоциты, далее оценивают
цитотоксический потенциал по секреции Perforin
CD8+ Т-клетками и CD16+ и CD56+ NK-клетками
с помощью оценки индекса цитотоксичности, для
расчета которого все лимфоциты рассматривают
на дот плотах CD8-APC-H7/Perforin-PerCP-Cy5.5,
CD16-РЕ-CF594/Perforin-PerCP-Cy5.5 и CD56-PECy7/Perforin-PerCP-Cy5.5 соответственно, далее
оценивают индексы цитотоксичности по Granzyme
В для CD8+ Т-клеток и CD16+ и CD56+ NK-клеток
на дот плотах CD8-APC-H7/Granzyme B-BV421,
CD16-PE-CF594/Granzyme В-BV421 и CD56-PECy7/Granzyme B-BV421 соответственно, после
чего проводят анализ активационного потенциала
CD8+ Т-клеток по экспрессии CD38 и HLA-DR
среди CD3+ Т-клеток из всех лимфоцитов и
отдельно среди CD8+ Т-клеток. Настоящее
изобретение обеспечивает создание способа
анализа активационного статуса CD8+ Т-клеток
и цитотоксического потенциала CD8+ и NKлимфоцитов иммунного микроокружения
нейроэндокринных опухолей гипофиза при
помощи многопараметрической проточной
цитометрии на основе 10-цветной панели антител,
где оптимально скомбинированы пары антителофлуорохром и подобраны CD-антигены,
обладающие прогностической силой выявления
агрессивных и резистентных к терапии аденом. 8
ил., 3 табл., 2 пр.
%U https://repo.bashgmu.ru/publication/5588