G(8344) mutation as the only manifestation of disease in a carrier of myoclonus epilepsy and ragged-red fibers (MERRF) syndrome. Am J Hum Genet. 1993r;52(3):551–6. PMID: 8447321","Мазунин И.О., Володько Н.В., Стариковская Е.Б., Сукерник Р.И. Митохондриальный геном и митохондриальные заболевания человека. Молекулярная биология. 2010;44(5):755–72.","Celentano V., Esposito E., Perrotta S., Giglio M.C., Tarquini R., Luglio G., et al. Madelung disease: report of a case and review of the literature. Acta Chir Belg. 2014;114(6):417–20. PMID: 26021689","Lemaitre M., Chevalier B., Jannin A., Bourry J., Espiard S., Vantyghem M.C. Multiple symmetric and multiple familial lipomatosis. Presse Med. 2021;50(3):104077. DOI: 10.1016/j.lpm.2021.104077","Вецмадян Е.А., Труфанов Г.Е., Рязанов В.В., Мостовая О.Т., Новиков К.В., Карайванов Н.С. Ультразвуковая диагностика липом мягких тканей с использованием методик цветного допплеровского картирования и эластографии. Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2012;2(38):43–50.","Богов А.А., Андреев П.С., Филиппов В.Л., Топыркин В.Г. Оперативное лечение болезни Маделунга. Практическая медицина. 2018;16(7-1):90–3.","Уракова Е.В., Нестеров О.В., Ильина Р.Ю., Лексин Р.В. Хирургическая тактика при рецидивирующем липоматозе (болезни Маделунга). Клинический случай. Практическая медицина. 2022;20(6):131–3.","Егай А.А., Тентимишев А.Э., Норматов Р.М., Тян А.С. Хирургическое лечение множественного симметричного липоматоза (болезнь Маделунга), осложненного сдавлением яремных вен с обеих сторон. Преимущества липэктомии перед липосакцией. Научное обозрение. Медицинские науки. 2022;1:5– 10. DOI: 10.17513/srms.1225","Тимербулатов М.В., Шорнина А.С., Лихтер Р.А., Каипов А.Э. Оценка липосакции в структуре абдоминопластики и сочетанной герниоабдоминопластики. Креативная хирургия и онкология. 2023;13(4):278–83. DOI: 10.24060/2076-3093-2023-13-4-278-283","Dang Y., Du X., Ou X., Zheng Q., Xie F. Advances in diagnosis and treatment of Madelung’s deformity. Am J Transl Res. 2023;15(7):4416–24.","Leti Acciaro A, Garagnani L, Lando M, Lana D, Sartini S, Adani R. Modified dome osteotomy and anterior locking plate fixation for distal radius variant of Madelung deformity: a retrospective study. J Plast Surg Hand Surg. 2022;56(2):121–6. DOI: 10.1080/2000656X.2021.1934845","Liu Q., Lyu H., Xu B., Lee J.H. Madelung disease epidemiology and clinical characteristics: a systemic review. Aesthetic Plast Surg. 2021;45(3):977–86. DOI: 10.1007/s00266-020-02083-5","Sia K.J., Tang I.P., Tan T.Y. Multiple symmetrical lipomatosis: case report and literature review. J Laryngol Otol. 2012;126(7):756–8. DOI: 10.1017/S0022215112000709","Kratz C., Lenard H.G., Ruzicka T., Gärtner J. Multiple symmetric lipomatosis: an unusual cause of childhood obesity and mental retardation. Eur J Paediatr Neurol. 2000;4(2):63–7. DOI: 10.1053/ejpn.2000.0264","Nounla J., Rolle U., Gräfe G., Kräling K. Benign symmetric lipomatosis with myelomeningocele in an adolescent: An uncommon association-case report. J Pediatr Surg. 2001;36(7):E13. DOI: 10.1053/jpsu.2001.24776","Madelung O.W. Über den Fetthals (diffuses Lipom des Halses). Arch Klin Chir. 1888;37:106-30.","Lanois P.E., Bensaude R. De ladeno-lipomatosesymetrique. Bull Mem Soc Med Hosp. 1898;1:298.","El Ouahabi H., Doubi S., Lahlou K., Boujraf S., Ajdi F. Launois-bensaude syndrome: A benign symmetric lipomatosis without alcohol association. Ann Afr Med. 2017;16(1):33–4. DOI: 10.4103/1596-3519.202082","Chen C.Y., Fang Q.Q., Wang X.F., Zhang M.X., Zhao W.Y., Shi B.H., et al. Madelung’s disease: lipectomy or liposuction? Biomed Res Int. 2018;3975974. DOI: 10.1155/2018/3975974","Coker J.E., Bryan J.A. Endocrine and metabolic disorders: Causes and pathogenesis of obesity. J. Fam. Pract. 2008;4:21–6.","González-García R., Rodríguez-Campo F.J., Sastre-Pérez J., Muñoz-Guerra M.F. Benign symmetric lipomatosis (Madelung’s disease): case reports and current management. Aesthetic Plast Surg. 2004;28(2):108– 12; discussion 113. DOI: 10.1007/s00266-004-3123-5","Holme E., Larsson N.G., Oldfors A., Tulinius M., Sahlin P., Stenman G. Multiple symmetric lipomas with high levels of mtDNA with the tRNA(Lys) A-->G(8344) mutation as the only manifestation of disease in a carrier of myoclonus epilepsy and ragged-red fibers (MERRF) syndrome. Am J Hum Genet. 1993r;52(3):551–6. PMID: 8447321","Мазунин И.О., Володько Н.В., Стариковская Е.Б., Сукерник Р.И. Митохондриальный геном и митохондриальные заболевания человека. Молекулярная биология. 2010;44(5):755–72.","Celentano V., Esposito E., Perrotta S., Giglio M.C., Tarquini R., Luglio G., et al. Madelung disease: report of a case and review of the literature. Acta Chir Belg. 2014;114(6):417–20. PMID: 26021689","Lemaitre M., Chevalier B., Jannin A., Bourry J., Espiard S., Vantyghem M.C. Multiple symmetric and multiple familial lipomatosis. Presse Med. 2021;50(3):104077. DOI: 10.1016/j.lpm.2021.104077","Вецмадян Е.А., Труфанов Г.Е., Рязанов В.В., Мостовая О.Т., Новиков К.В., Карайванов Н.С. Ультразвуковая диагностика липом мягких тканей с использованием методик цветного допплеровского картирования и эластографии. Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2012;2(38):43–50.","Богов А.А., Андреев П.С., Филиппов В.Л., Топыркин В.Г. Оперативное лечение болезни Маделунга. Практическая медицина. 2018;16(7-1):90–3.","Уракова Е.В., Нестеров О.В., Ильина Р.Ю., Лексин Р.В. Хирургическая тактика при рецидивирующем липоматозе (болезни Маделунга). Клинический случай. Практическая медицина. 2022;20(6):131–3.","Егай А.А., Тентимишев А.Э., Норматов Р.М., Тян А.С. Хирургическое лечение множественного симметричного липоматоза (болезнь Маделунга), осложненного сдавлением яремных вен с обеих сторон. Преимущества липэктомии перед липосакцией. Научное обозрение. Медицинские науки. 2022;1:5– 10. DOI: 10.17513/srms.1225","Тимербулатов М.В., Шорнина А.С., Лихтер Р.А., Каипов А.Э. Оценка липосакции в структуре абдоминопластики и сочетанной герниоабдоминопластики. Креативная хирургия и онкология. 2023;13(4):278–83. DOI: 10.24060/2076-3093-2023-13-4-278-283","Dang Y., Du X., Ou X., Zheng Q., Xie F. Advances in diagnosis and treatment of Madelung’s deformity. Am J Transl Res. 2023;15(7):4416–24.","Leti Acciaro A, Garagnani L, Lando M, Lana D, Sartini S, Adani R. Modified dome osteotomy and anterior locking plate fixation for distal radius variant of Madelung deformity: a retrospective study. J Plast Surg Hand Surg. 2022;56(2):121–6. DOI: 10.1080/2000656X.2021.1934845"],"dc.citation.ru":["Liu Q., Lyu H., Xu B., Lee J.H. Madelung disease epidemiology and clinical characteristics: a systemic review. Aesthetic Plast Surg. 2021;45(3):977–86. DOI: 10.1007/s00266-020-02083-5","Sia K.J., Tang I.P., Tan T.Y. Multiple symmetrical lipomatosis: case report and literature review. J Laryngol Otol. 2012;126(7):756–8. DOI: 10.1017/S0022215112000709","Kratz C., Lenard H.G., Ruzicka T., Gärtner J. Multiple symmetric lipomatosis: an unusual cause of childhood obesity and mental retardation. Eur J Paediatr Neurol. 2000;4(2):63–7. DOI: 10.1053/ejpn.2000.0264","Nounla J., Rolle U., Gräfe G., Kräling K. Benign symmetric lipomatosis with myelomeningocele in an adolescent: An uncommon association-case report. J Pediatr Surg. 2001;36(7):E13. DOI: 10.1053/jpsu.2001.24776","Madelung O.W. Über den Fetthals (diffuses Lipom des Halses). Arch Klin Chir. 1888;37:106-30.","Lanois P.E., Bensaude R. De ladeno-lipomatosesymetrique. Bull Mem Soc Med Hosp. 1898;1:298.","El Ouahabi H., Doubi S., Lahlou K., Boujraf S., Ajdi F. Launois-bensaude syndrome: A benign symmetric lipomatosis without alcohol association. Ann Afr Med. 2017;16(1):33–4. DOI: 10.4103/1596-3519.202082","Chen C.Y., Fang Q.Q., Wang X.F., Zhang M.X., Zhao W.Y., Shi B.H., et al. Madelung’s disease: lipectomy or liposuction? Biomed Res Int. 2018;3975974. DOI: 10.1155/2018/3975974","Coker J.E., Bryan J.A. Endocrine and metabolic disorders: Causes and pathogenesis of obesity. J. Fam. Pract. 2008;4:21–6.","González-García R., Rodríguez-Campo F.J., Sastre-Pérez J., Muñoz-Guerra M.F. Benign symmetric lipomatosis (Madelung’s disease): case reports and current management. Aesthetic Plast Surg. 2004;28(2):108– 12; discussion 113. DOI: 10.1007/s00266-004-3123-5","Holme E., Larsson N.G., Oldfors A., Tulinius M., Sahlin P., Stenman G. Multiple symmetric lipomas with high levels of mtDNA with the tRNA(Lys) A-->G(8344) mutation as the only manifestation of disease in a carrier of myoclonus epilepsy and ragged-red fibers (MERRF) syndrome. Am J Hum Genet. 1993r;52(3):551–6. PMID: 8447321","Мазунин И.О., Володько Н.В., Стариковская Е.Б., Сукерник Р.И. Митохондриальный геном и митохондриальные заболевания человека. Молекулярная биология. 2010;44(5):755–72.","Celentano V., Esposito E., Perrotta S., Giglio M.C., Tarquini R., Luglio G., et al. Madelung disease: report of a case and review of the literature. Acta Chir Belg. 2014;114(6):417–20. PMID: 26021689","Lemaitre M., Chevalier B., Jannin A., Bourry J., Espiard S., Vantyghem M.C. Multiple symmetric and multiple familial lipomatosis. Presse Med. 2021;50(3):104077. DOI: 10.1016/j.lpm.2021.104077","Вецмадян Е.А., Труфанов Г.Е., Рязанов В.В., Мостовая О.Т., Новиков К.В., Карайванов Н.С. Ультразвуковая диагностика липом мягких тканей с использованием методик цветного допплеровского картирования и эластографии. Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2012;2(38):43–50.","Богов А.А., Андреев П.С., Филиппов В.Л., Топыркин В.Г. Оперативное лечение болезни Маделунга. Практическая медицина. 2018;16(7-1):90–3.","Уракова Е.В., Нестеров О.В., Ильина Р.Ю., Лексин Р.В. Хирургическая тактика при рецидивирующем липоматозе (болезни Маделунга). Клинический случай. Практическая медицина. 2022;20(6):131–3.","Егай А.А., Тентимишев А.Э., Норматов Р.М., Тян А.С. Хирургическое лечение множественного симметричного липоматоза (болезнь Маделунга), осложненного сдавлением яремных вен с обеих сторон. Преимущества липэктомии перед липосакцией. Научное обозрение. Медицинские науки. 2022;1:5– 10. DOI: 10.17513/srms.1225","Тимербулатов М.В., Шорнина А.С., Лихтер Р.А., Каипов А.Э. Оценка липосакции в структуре абдоминопластики и сочетанной герниоабдоминопластики. Креативная хирургия и онкология. 2023;13(4):278–83. DOI: 10.24060/2076-3093-2023-13-4-278-283","Dang Y., Du X., Ou X., Zheng Q., Xie F. Advances in diagnosis and treatment of Madelung’s deformity. Am J Transl Res. 2023;15(7):4416–24.","Leti Acciaro A, Garagnani L, Lando M, Lana D, Sartini S, Adani R. Modified dome osteotomy and anterior locking plate fixation for distal radius variant of Madelung deformity: a retrospective study. J Plast Surg Hand Surg. 2022;56(2):121–6. DOI: 10.1080/2000656X.2021.1934845"],"dc.citation.en":["Liu Q., Lyu H., Xu B., Lee J.H. Madelung disease epidemiology and clinical characteristics: a systemic review. Aesthetic Plast Surg. 2021;45(3):977–86. DOI: 10.1007/s00266-020-02083-5","Sia K.J., Tang I.P., Tan T.Y. Multiple symmetrical lipomatosis: case report and literature review. J Laryngol Otol. 2012;126(7):756–8. DOI: 10.1017/S0022215112000709","Kratz C., Lenard H.G., Ruzicka T., Gärtner J. Multiple symmetric lipomatosis: an unusual cause of childhood obesity and mental retardation. Eur J Paediatr Neurol. 2000;4(2):63–7. DOI: 10.1053/ejpn.2000.0264","Nounla J., Rolle U., Gräfe G., Kräling K. Benign symmetric lipomatosis with myelomeningocele in an adolescent: An uncommon association-case report. J Pediatr Surg. 2001;36(7):E13. DOI: 10.1053/jpsu.2001.24776","Madelung O.W. Über den Fetthals (diffuses Lipom des Halses). Arch Klin Chir. 1888;37:106-30.","Lanois P.E., Bensaude R. De ladeno-lipomatosesymetrique. Bull Mem Soc Med Hosp. 1898;1:298.","El Ouahabi H., Doubi S., Lahlou K., Boujraf S., Ajdi F. Launois-bensaude syndrome: A benign symmetric lipomatosis without alcohol association. Ann Afr Med. 2017;16(1):33–4. DOI: 10.4103/1596-3519.202082","Chen C.Y., Fang Q.Q., Wang X.F., Zhang M.X., Zhao W.Y., Shi B.H., et al. Madelung’s disease: lipectomy or liposuction? Biomed Res Int. 2018;3975974. DOI: 10.1155/2018/3975974","Coker J.E., Bryan J.A. Endocrine and metabolic disorders: Causes and pathogenesis of obesity. J. Fam. Pract. 2008;4:21–6.","González-García R., Rodríguez-Campo F.J., Sastre-Pérez J., Muñoz-Guerra M.F. Benign symmetric lipomatosis (Madelung’s disease): case reports and current management. Aesthetic Plast Surg. 2004;28(2):108– 12; discussion 113. DOI: 10.1007/s00266-004-3123-5","Holme E., Larsson N.G., Oldfors A., Tulinius M., Sahlin P., Stenman G. Multiple symmetric lipomas with high levels of mtDNA with the tRNA(Lys) A-->G(8344) mutation as the only manifestation of disease in a carrier of myoclonus epilepsy and ragged-red fibers (MERRF) syndrome. Am J Hum Genet. 1993r;52(3):551–6. PMID: 8447321","Мазунин И.О., Володько Н.В., Стариковская Е.Б., Сукерник Р.И. Митохондриальный геном и митохондриальные заболевания человека. Молекулярная биология. 2010;44(5):755–72.","Celentano V., Esposito E., Perrotta S., Giglio M.C., Tarquini R., Luglio G., et al. Madelung disease: report of a case and review of the literature. Acta Chir Belg. 2014;114(6):417–20. PMID: 26021689","Lemaitre M., Chevalier B., Jannin A., Bourry J., Espiard S., Vantyghem M.C. Multiple symmetric and multiple familial lipomatosis. Presse Med. 2021;50(3):104077. DOI: 10.1016/j.lpm.2021.104077","Вецмадян Е.А., Труфанов Г.Е., Рязанов В.В., Мостовая О.Т., Новиков К.В., Карайванов Н.С. Ультразвуковая диагностика липом мягких тканей с использованием методик цветного допплеровского картирования и эластографии. Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2012;2(38):43–50.","Богов А.А., Андреев П.С., Филиппов В.Л., Топыркин В.Г. Оперативное лечение болезни Маделунга. Практическая медицина. 2018;16(7-1):90–3.","Уракова Е.В., Нестеров О.В., Ильина Р.Ю., Лексин Р.В. Хирургическая тактика при рецидивирующем липоматозе (болезни Маделунга). Клинический случай. Практическая медицина. 2022;20(6):131–3.","Егай А.А., Тентимишев А.Э., Норматов Р.М., Тян А.С. Хирургическое лечение множественного симметричного липоматоза (болезнь Маделунга), осложненного сдавлением яремных вен с обеих сторон. Преимущества липэктомии перед липосакцией. Научное обозрение. Медицинские науки. 2022;1:5– 10. DOI: 10.17513/srms.1225","Тимербулатов М.В., Шорнина А.С., Лихтер Р.А., Каипов А.Э. Оценка липосакции в структуре абдоминопластики и сочетанной герниоабдоминопластики. Креативная хирургия и онкология. 2023;13(4):278–83. DOI: 10.24060/2076-3093-2023-13-4-278-283","Dang Y., Du X., Ou X., Zheng Q., Xie F. Advances in diagnosis and treatment of Madelung’s deformity. Am J Transl Res. 2023;15(7):4416–24.","Leti Acciaro A, Garagnani L, Lando M, Lana D, Sartini S, Adani R. Modified dome osteotomy and anterior locking plate fixation for distal radius variant of Madelung deformity: a retrospective study. J Plast Surg Hand Surg. 2022;56(2):121–6. DOI: 10.1080/2000656X.2021.1934845"],"dc.identifier.uri":["http://hdl.handle.net/123456789/8932"],"dc.date.accessioned_dt":"2025-07-09T13:59:02Z","dc.date.accessioned":["2025-07-09T13:59:02Z"],"dc.date.available":["2025-07-09T13:59:02Z"],"publication_grp":["123456789/8932"],"bi_4_dis_filter":["madelung’s disease\n|||\nMadelung’s disease","lipectomy\n|||\nlipectomy","диффузный симметричный липоматоз\n|||\nдиффузный симметричный липоматоз","шеи новообразования\n|||\nшеи новообразования","липэктомия\n|||\nлипэктомия","diffuse symmetric lipomatosis\n|||\ndiffuse symmetric lipomatosis","adipose tissue proliferation\n|||\nadipose tissue proliferation","жировой ткани разрастание\n|||\nжировой ткани разрастание","болезнь маделунга\n|||\nболезнь Маделунга","neck neoplasms\n|||\nneck neoplasms"],"bi_4_dis_partial":["липэктомия","Madelung’s disease","diffuse symmetric lipomatosis","neck neoplasms","болезнь Маделунга","adipose tissue proliferation","шеи новообразования","lipectomy","диффузный симметричный липоматоз","жировой ткани разрастание"],"bi_4_dis_value_filter":["липэктомия","Madelung’s disease","diffuse symmetric lipomatosis","neck neoplasms","болезнь Маделунга","adipose tissue proliferation","шеи новообразования","lipectomy","диффузный симметричный липоматоз","жировой ткани разрастание"],"bi_sort_1_sort":"systemic benign lipomatosis (madelung’s disease): experience of surgical treatment. clinical case","bi_sort_3_sort":"2025-07-09T13:59:02Z","read":["g0"],"_version_":1837178072511545344},{"SolrIndexer.lastIndexed":"2021-04-20T11:26:32.829Z","search.uniqueid":"2-3461","search.resourcetype":2,"search.resourceid":3461,"handle":"123456789/4375","location":["m195","l687"],"location.comm":["195"],"location.coll":["687"],"withdrawn":"false","discoverable":"true","dc.date.accessioned_dt":"2019-10-16T13:14:19Z","dc.date.accessioned":["2019-10-16T13:14:19Z"],"dc.date.available":["2019-10-16T13:14:19Z"],"dc.identifier.uri":["http://hdl.handle.net/123456789/4375"],"dc.rights":["CC BY 4.0"],"dc.source":["Creative surgery and oncology","Креативная хирургия и онкология"],"dc.source.en":["Creative surgery and oncology"],"dc.source.ru":["Креативная хирургия и онкология"],"subject":["RNA extraction","small RNA","next-generation sequencing","cerebrospinal fluid","biological fluids","экстракция РНК","малые РНК","секвенирование нового поколения","цереброспинальная жидкость","биологические жидкости"],"subject_keyword":["RNA extraction","RNA extraction","small RNA","small RNA","next-generation sequencing","next-generation sequencing","cerebrospinal fluid","cerebrospinal fluid","biological fluids","biological fluids","экстракция РНК","экстракция РНК","малые РНК","малые РНК","секвенирование нового поколения","секвенирование нового поколения","цереброспинальная жидкость","цереброспинальная жидкость","биологические жидкости","биологические жидкости"],"subject_ac":["rna extraction\n|||\nRNA extraction","small rna\n|||\nsmall RNA","next-generation sequencing\n|||\nnext-generation sequencing","cerebrospinal fluid\n|||\ncerebrospinal fluid","biological fluids\n|||\nbiological fluids","экстракция рнк\n|||\nэкстракция РНК","малые рнк\n|||\nмалые РНК","секвенирование нового поколения\n|||\nсеквенирование нового поколения","цереброспинальная жидкость\n|||\nцереброспинальная жидкость","биологические жидкости\n|||\nбиологические жидкости"],"subject_tax_0_filter":["rna extraction\n|||\nRNA extraction","small rna\n|||\nsmall RNA","next-generation sequencing\n|||\nnext-generation sequencing","cerebrospinal fluid\n|||\ncerebrospinal fluid","biological fluids\n|||\nbiological fluids","экстракция рнк\n|||\nэкстракция РНК","малые рнк\n|||\nмалые РНК","секвенирование нового поколения\n|||\nсеквенирование нового поколения","цереброспинальная жидкость\n|||\nцереброспинальная жидкость","биологические жидкости\n|||\nбиологические жидкости"],"subject_filter":["rna extraction\n|||\nRNA extraction","small rna\n|||\nsmall RNA","next-generation sequencing\n|||\nnext-generation sequencing","cerebrospinal fluid\n|||\ncerebrospinal fluid","biological fluids\n|||\nbiological fluids","экстракция рнк\n|||\nэкстракция РНК","малые рнк\n|||\nмалые РНК","секвенирование нового поколения\n|||\nсеквенирование нового поколения","цереброспинальная жидкость\n|||\nцереброспинальная жидкость","биологические жидкости\n|||\nбиологические жидкости"],"dc.subject_mlt":["RNA extraction","small RNA","next-generation sequencing","cerebrospinal fluid","biological fluids","экстракция РНК","малые РНК","секвенирование нового поколения","цереброспинальная жидкость","биологические жидкости"],"dc.subject":["RNA extraction","small RNA","next-generation sequencing","cerebrospinal fluid","biological fluids","экстракция РНК","малые РНК","секвенирование нового поколения","цереброспинальная жидкость","биологические жидкости"],"dc.subject.en":["RNA extraction","small RNA","next-generation sequencing","cerebrospinal fluid","biological fluids"],"dc.subject.ru":["экстракция РНК","малые РНК","секвенирование нового поколения","цереброспинальная жидкость","биологические жидкости"],"title":["Extracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing","Экстракция малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения"],"title_keyword":["Extracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing","Экстракция малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения"],"title_ac":["extracting small rnas from human biological fluids for subsequent next-generation sequencing\n|||\nExtracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing","экстракция малых рнк из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения\n|||\nЭкстракция малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения"],"dc.title_sort":"Extracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing","dc.title_hl":["Extracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing","Экстракция малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения"],"dc.title_mlt":["Extracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing","Экстракция малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения"],"dc.title":["Extracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing","Экстракция малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения"],"dc.title_stored":["Extracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nen","Экстракция малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nru"],"dc.title.en":["Extracting Small RNAs from Human Biological Fluids for Subsequent Next-Generation Sequencing"],"dc.title.ru":["Экстракция малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения"],"dc.citation":["Baudhuin L.M. Quality guidelines for next-generation sequencing. Clin Chem 2013;59:858–9. DOI: 10.1373/clinchem.2013.203091","Castel S.E., Martienssen R.A. RNA interference in the nucleus: roles for small RNAs in transcription, epigenetics and beyond. Nature. 2013;14:100–12. DOI: 10.1038/nrg3355","Fire A., Xu S., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998;(391):806–11. DOI: 10.1038/35888","O`Brien J., Hayder H., Zayed Y., Chun Peng. Overview of MicroRNA biogenesis, mechanisms of actions, and circulation. Front Endocrinol (Lausanne). 2018;9:402. DOI: 10.3389/fendo.2018.00402","Wang H., Zhong J., Chai Z., Zhu J., Xin J. Comparative expression profile of microRNAs and piRNAs in three ruminant species testes using next-generation sequencing. Reprod Domest Anim. 2018;53(4):963– 70. DOI: 10.1111/rda.13195","Schee K., Lorenz S., Worren M.M., Günther C.C., Holden M., Hovig E. et al. Deep sequencing the microRNA transcriptome in colorectal cancer. PLoS One. 2013;8:e66165. DOI: 10.1371/journal.pone.0066165","Chana G., Bousman C.A., Money T.T., Gibbons A., Gillett P., Dean B. et al. Biomarker investigations related to pathophysiological pathways in schizophrenia and psychosis. Front Cell Neurosci. 2013;7:95. DOI: 10.3389/fncel.2013.00095","Liu L., Wang J., Khanabdali R., Kalionis B., Tai X., Xia S. Circular RNAs: Isolation, characterization and their potential role in diseases. RNA Biol. 2017;14(12):1715–21. DOI: 10.1080/15476286.2017.1367886","Lekchnov E.A., Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Bryzgunova O.E., Vlassov V.V., Laktionov P.P. Protocol for miRNA isolation from biofluids. Anal Biochem. 2016;499:78–84. DOI: 10.1016/j.ab.2016.01.025","Burgos K.L., Javaherian A., Bomprezzi R., Ghaffari L., Rhodes S., Courtright A. et al. Identification of extracellular miRNA in human cerebrospinal fluid by next-generation sequencing. RNA. 2013;5:712–22. DOI: 10.1261/rna.036863.112","Sun Z., Shi K., Yang S., Liu J., Zhou Q., Wang G. et al. Effect of exosomal miRNA on cancer biology and clinical applications. Mol Cancer. 2018;17(1):147. DOI: 10.1186/s12943-018-0897-7","Anfossi S., Babayan A., Pantel K., Calin G.A. Clinical utility of circulating non-coding RNAs — an update. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(9):541–63. DOI: 10.1038/s41571-018-0035-x","Amini P., Ettlin J., Opitz L., lementi E., Malbon A., Markkanen E. An optimised protocol for isolation of RNA from small sections of laser-capture microdissected FFPE tissue amenable for next-generation sequencing. Mol Biol. 2017;18(1):22. DOI: 10.1186/s12867-017-0099-7","Majem B., Li F., Sun J., Wong D.T. RNA sequencing analysis of salivary extracellular RNA. Methods Mol Biol. 2017;1537:17–36. DOI: 10.1007/978-1-4939-6685-1_2","Gautam A., Kumar R., Dimitrov G., Hoke A., Hammamieh R., Jett M. Identifi ation of extracellular miRNA in archived serum samples by nextgeneration sequencing from RNA extracted using multiple methods. Mol Biol Rep. 2016;43(10):1165–78. DOI: 10.1007/s11033-016-4043-6","Acosta A.M., Al Rasheed M.R.H., Pins M.R., Borgen K.R., Panchal D., Rogozinska M. et al. The role of next-generation sequencing in the differential diagnosis of composite neoplasms. Hum Pathol. 2018;81:7888. DOI: 10.1016/j.humpath.2018.06.022","Baudhuin L.M. Quality guidelines for next-generation sequencing. Clin Chem 2013;59:858–9. DOI: 10.1373/clinchem.2013.203091","Castel S.E., Martienssen R.A. RNA interference in the nucleus: roles for small RNAs in transcription, epigenetics and beyond. Nature. 2013;14:100–12. DOI: 10.1038/nrg3355","Fire A., Xu S., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998;(391):806–11. DOI: 10.1038/35888","O`Brien J., Hayder H., Zayed Y., Chun Peng. Overview of MicroRNA biogenesis, mechanisms of actions, and circulation. Front Endocrinol (Lausanne). 2018;9:402. DOI: 10.3389/fendo.2018.00402","Wang H., Zhong J., Chai Z., Zhu J., Xin J. Comparative expression profile of microRNAs and piRNAs in three ruminant species testes using next-generation sequencing. Reprod Domest Anim. 2018;53(4):963– 70. DOI: 10.1111/rda.13195","Schee K., Lorenz S., Worren M.M., Günther C.C., Holden M., Hovig E. et al. Deep sequencing the microRNA transcriptome in colorectal cancer. PLoS One. 2013;8:e66165. DOI: 10.1371/journal.pone.0066165","Chana G., Bousman C.A., Money T.T., Gibbons A., Gillett P., Dean B. et al. Biomarker investigations related to pathophysiological pathways in schizophrenia and psychosis. Front Cell Neurosci. 2013;7:95. DOI: 10.3389/fncel.2013.00095","Liu L., Wang J., Khanabdali R., Kalionis B., Tai X., Xia S. Circular RNAs: Isolation, characterization and their potential role in diseases. RNA Biol. 2017;14(12):1715–21. DOI: 10.1080/15476286.2017.1367886","Lekchnov E.A., Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Bryzgunova O.E., Vlassov V.V., Laktionov P.P. Protocol for miRNA isolation from biofluids. Anal Biochem. 2016;499:78–84. DOI: 10.1016/j.ab.2016.01.025","Burgos K.L., Javaherian A., Bomprezzi R., Ghaffari L., Rhodes S., Courtright A. et al. Identification of extracellular miRNA in human cerebrospinal fluid by next-generation sequencing. RNA. 2013;5:712–22. DOI: 10.1261/rna.036863.112","Sun Z., Shi K., Yang S., Liu J., Zhou Q., Wang G. et al. Effect of exosomal miRNA on cancer biology and clinical applications. Mol Cancer. 2018;17(1):147. DOI: 10.1186/s12943-018-0897-7","Anfossi S., Babayan A., Pantel K., Calin G.A. Clinical utility of circulating non-coding RNAs — an update. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(9):541–63. DOI: 10.1038/s41571-018-0035-x","Amini P., Ettlin J., Opitz L., lementi E., Malbon A., Markkanen E. An optimised protocol for isolation of RNA from small sections of laser-capture microdissected FFPE tissue amenable for next-generation sequencing. Mol Biol. 2017;18(1):22. DOI: 10.1186/s12867-017-0099-7","Majem B., Li F., Sun J., Wong D.T. RNA sequencing analysis of salivary extracellular RNA. Methods Mol Biol. 2017;1537:17–36. DOI: 10.1007/978-1-4939-6685-1_2","Gautam A., Kumar R., Dimitrov G., Hoke A., Hammamieh R., Jett M. Identifi ation of extracellular miRNA in archived serum samples by nextgeneration sequencing from RNA extracted using multiple methods. Mol Biol Rep. 2016;43(10):1165–78. DOI: 10.1007/s11033-016-4043-6","Acosta A.M., Al Rasheed M.R.H., Pins M.R., Borgen K.R., Panchal D., Rogozinska M. et al. The role of next-generation sequencing in the differential diagnosis of composite neoplasms. Hum Pathol. 2018;81:7888. DOI: 10.1016/j.humpath.2018.06.022"],"dc.citation.ru":["Baudhuin L.M. Quality guidelines for next-generation sequencing. Clin Chem 2013;59:858–9. DOI: 10.1373/clinchem.2013.203091","Castel S.E., Martienssen R.A. RNA interference in the nucleus: roles for small RNAs in transcription, epigenetics and beyond. Nature. 2013;14:100–12. DOI: 10.1038/nrg3355","Fire A., Xu S., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998;(391):806–11. DOI: 10.1038/35888","O`Brien J., Hayder H., Zayed Y., Chun Peng. Overview of MicroRNA biogenesis, mechanisms of actions, and circulation. Front Endocrinol (Lausanne). 2018;9:402. DOI: 10.3389/fendo.2018.00402","Wang H., Zhong J., Chai Z., Zhu J., Xin J. Comparative expression profile of microRNAs and piRNAs in three ruminant species testes using next-generation sequencing. Reprod Domest Anim. 2018;53(4):963– 70. DOI: 10.1111/rda.13195","Schee K., Lorenz S., Worren M.M., Günther C.C., Holden M., Hovig E. et al. Deep sequencing the microRNA transcriptome in colorectal cancer. PLoS One. 2013;8:e66165. DOI: 10.1371/journal.pone.0066165","Chana G., Bousman C.A., Money T.T., Gibbons A., Gillett P., Dean B. et al. Biomarker investigations related to pathophysiological pathways in schizophrenia and psychosis. Front Cell Neurosci. 2013;7:95. DOI: 10.3389/fncel.2013.00095","Liu L., Wang J., Khanabdali R., Kalionis B., Tai X., Xia S. Circular RNAs: Isolation, characterization and their potential role in diseases. RNA Biol. 2017;14(12):1715–21. DOI: 10.1080/15476286.2017.1367886","Lekchnov E.A., Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Bryzgunova O.E., Vlassov V.V., Laktionov P.P. Protocol for miRNA isolation from biofluids. Anal Biochem. 2016;499:78–84. DOI: 10.1016/j.ab.2016.01.025","Burgos K.L., Javaherian A., Bomprezzi R., Ghaffari L., Rhodes S., Courtright A. et al. Identification of extracellular miRNA in human cerebrospinal fluid by next-generation sequencing. RNA. 2013;5:712–22. DOI: 10.1261/rna.036863.112","Sun Z., Shi K., Yang S., Liu J., Zhou Q., Wang G. et al. Effect of exosomal miRNA on cancer biology and clinical applications. Mol Cancer. 2018;17(1):147. DOI: 10.1186/s12943-018-0897-7","Anfossi S., Babayan A., Pantel K., Calin G.A. Clinical utility of circulating non-coding RNAs — an update. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(9):541–63. DOI: 10.1038/s41571-018-0035-x","Amini P., Ettlin J., Opitz L., lementi E., Malbon A., Markkanen E. An optimised protocol for isolation of RNA from small sections of laser-capture microdissected FFPE tissue amenable for next-generation sequencing. Mol Biol. 2017;18(1):22. DOI: 10.1186/s12867-017-0099-7","Majem B., Li F., Sun J., Wong D.T. RNA sequencing analysis of salivary extracellular RNA. Methods Mol Biol. 2017;1537:17–36. DOI: 10.1007/978-1-4939-6685-1_2","Gautam A., Kumar R., Dimitrov G., Hoke A., Hammamieh R., Jett M. Identifi ation of extracellular miRNA in archived serum samples by nextgeneration sequencing from RNA extracted using multiple methods. Mol Biol Rep. 2016;43(10):1165–78. DOI: 10.1007/s11033-016-4043-6","Acosta A.M., Al Rasheed M.R.H., Pins M.R., Borgen K.R., Panchal D., Rogozinska M. et al. The role of next-generation sequencing in the differential diagnosis of composite neoplasms. Hum Pathol. 2018;81:7888. DOI: 10.1016/j.humpath.2018.06.022"],"dc.citation.en":["Baudhuin L.M. Quality guidelines for next-generation sequencing. Clin Chem 2013;59:858–9. DOI: 10.1373/clinchem.2013.203091","Castel S.E., Martienssen R.A. RNA interference in the nucleus: roles for small RNAs in transcription, epigenetics and beyond. Nature. 2013;14:100–12. DOI: 10.1038/nrg3355","Fire A., Xu S., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998;(391):806–11. DOI: 10.1038/35888","O`Brien J., Hayder H., Zayed Y., Chun Peng. Overview of MicroRNA biogenesis, mechanisms of actions, and circulation. Front Endocrinol (Lausanne). 2018;9:402. DOI: 10.3389/fendo.2018.00402","Wang H., Zhong J., Chai Z., Zhu J., Xin J. Comparative expression profile of microRNAs and piRNAs in three ruminant species testes using next-generation sequencing. Reprod Domest Anim. 2018;53(4):963– 70. DOI: 10.1111/rda.13195","Schee K., Lorenz S., Worren M.M., Günther C.C., Holden M., Hovig E. et al. Deep sequencing the microRNA transcriptome in colorectal cancer. PLoS One. 2013;8:e66165. DOI: 10.1371/journal.pone.0066165","Chana G., Bousman C.A., Money T.T., Gibbons A., Gillett P., Dean B. et al. Biomarker investigations related to pathophysiological pathways in schizophrenia and psychosis. Front Cell Neurosci. 2013;7:95. DOI: 10.3389/fncel.2013.00095","Liu L., Wang J., Khanabdali R., Kalionis B., Tai X., Xia S. Circular RNAs: Isolation, characterization and their potential role in diseases. RNA Biol. 2017;14(12):1715–21. DOI: 10.1080/15476286.2017.1367886","Lekchnov E.A., Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Bryzgunova O.E., Vlassov V.V., Laktionov P.P. Protocol for miRNA isolation from biofluids. Anal Biochem. 2016;499:78–84. DOI: 10.1016/j.ab.2016.01.025","Burgos K.L., Javaherian A., Bomprezzi R., Ghaffari L., Rhodes S., Courtright A. et al. Identification of extracellular miRNA in human cerebrospinal fluid by next-generation sequencing. RNA. 2013;5:712–22. DOI: 10.1261/rna.036863.112","Sun Z., Shi K., Yang S., Liu J., Zhou Q., Wang G. et al. Effect of exosomal miRNA on cancer biology and clinical applications. Mol Cancer. 2018;17(1):147. DOI: 10.1186/s12943-018-0897-7","Anfossi S., Babayan A., Pantel K., Calin G.A. Clinical utility of circulating non-coding RNAs — an update. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(9):541–63. DOI: 10.1038/s41571-018-0035-x","Amini P., Ettlin J., Opitz L., lementi E., Malbon A., Markkanen E. An optimised protocol for isolation of RNA from small sections of laser-capture microdissected FFPE tissue amenable for next-generation sequencing. Mol Biol. 2017;18(1):22. DOI: 10.1186/s12867-017-0099-7","Majem B., Li F., Sun J., Wong D.T. RNA sequencing analysis of salivary extracellular RNA. Methods Mol Biol. 2017;1537:17–36. DOI: 10.1007/978-1-4939-6685-1_2","Gautam A., Kumar R., Dimitrov G., Hoke A., Hammamieh R., Jett M. Identifi ation of extracellular miRNA in archived serum samples by nextgeneration sequencing from RNA extracted using multiple methods. Mol Biol Rep. 2016;43(10):1165–78. DOI: 10.1007/s11033-016-4043-6","Acosta A.M., Al Rasheed M.R.H., Pins M.R., Borgen K.R., Panchal D., Rogozinska M. et al. The role of next-generation sequencing in the differential diagnosis of composite neoplasms. Hum Pathol. 2018;81:7888. DOI: 10.1016/j.humpath.2018.06.022"],"dc.author.full":["О. А. Бейлерли | Башкирский государственный медицинский университет","O. A. Beylerli | Bashkir State Medical University","А. Т. Бейлерли | Башкирский государственный медицинский университет","A. T Beylerli | Bashkir State Medical University","И. Ф. Гареев | Башкирский государственный медицинский университет","I. F. Garaev | Bashkir State Medical University"],"dc.author.full.ru":["О. А. Бейлерли | Башкирский государственный медицинский университет","А. Т. Бейлерли | Башкирский государственный медицинский университет","И. Ф. Гареев | Башкирский государственный медицинский университет"],"dc.author.full.en":["O. A. Beylerli | Bashkir State Medical University","A. T Beylerli | Bashkir State Medical University","I. F. Garaev | Bashkir State Medical University"],"dateIssued":["2019-04-25"],"dateIssued_keyword":["2019-04-25","2019"],"dateIssued_ac":["2019-04-25\n|||\n2019-04-25","2019"],"dateIssued.year":[2019],"dateIssued.year_sort":"2019","dc.date.published":["2019-04-25"],"dc.section":["LABORATORY AND EXPERIMENTAL INVESTIGATION","ЛАБОРАТОРНЫЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ"],"dc.section.en":["LABORATORY AND EXPERIMENTAL INVESTIGATION"],"dc.section.ru":["ЛАБОРАТОРНЫЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ"],"dc.doi":["10.24060/2076-3093-2019-9-1-80-86"],"dc.abstract":["

A number of questions arise when choosing methods for experiments related to next-generation sequencing. On the one hand, while working with RNA extraction, added reagents and their residues can often inhibit sensitive chemicals with which the sequential synthesis is carried out for the sequencing. On the other hand, processing the same data using different software for the analysis can also impact on the sequencing results. This paper will present the step by step procedure for the preparation of samples taken from human biological fluids for subsequent sequencing of small RNAs, small noncoding RNAs in particular. Regarding the methods of extraction or isolation of RNAs, we found that low RNA yield can be improved significantly by following the isolation method for total RNA and its fractions included in Ambion’s MirVana PARIS kit, but only if using a special approach and modifying the organic extraction step. Compared to others, the methods supplied with commercially available kits at the time of researching this paper require only one organic extraction. This simple but, as it turned out, very useful modification makes it possible to access previously unavailable material. Potential advantages of this modification include a more complete profiling of small non-coding RNAs and a broader access to small sample volumes, as a rule, access to human biological fluids which can be prepared for RNA sequencing on the Illumina platform.

","

Существует ряд вопросов при выборе методик для экспериментов, связанных с секвенированием нового поколения (Next-Generation Sequencing). С одной стороны, во время работы с экстракцией РНК добавленные реагенты и их остатки часто могут ингибировать чувствительные химические вещества, с помощью которых осуществляется последовательный синтез для секвенирования. С другой, обработка данных с применением различного программного обеспечения для анализа результатов также может влиять на результаты секвенирования. Текущая работа будет описывать поэтапно, как готовятся образцы из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования малых РНК, в частности некодирующих. Что касается способов экстракции или изоляции РНК, мы обнаружили, что малый выход РНК может быть значительно увеличен, по методу изоляции тотальной РНК и ее фракций, включенных в набор MirVana PARIS Kit от Ambion, при специальном подходе и модификации этапа органической экстракции. По сравнению с другими методиками поставляемые с имеющимися в продаже наборами на момент этой работы требуют только одной органической экстракции. Эта простая, но, как оказалось, весьма полезная модификация позволяет получить доступ к ранее недоступному материалу. Потенциальными преимуществами этой модификации являются более полное профилирование малых РНК, а также более широкий доступ к небольшим объемам образцов, как правило, доступ к биологическим жидкостям человека, которые могут быть приготовлены для секвенирования РНК на платформе Illumina.

"],"dc.abstract.en":["

A number of questions arise when choosing methods for experiments related to next-generation sequencing. On the one hand, while working with RNA extraction, added reagents and their residues can often inhibit sensitive chemicals with which the sequential synthesis is carried out for the sequencing. On the other hand, processing the same data using different software for the analysis can also impact on the sequencing results. This paper will present the step by step procedure for the preparation of samples taken from human biological fluids for subsequent sequencing of small RNAs, small noncoding RNAs in particular. Regarding the methods of extraction or isolation of RNAs, we found that low RNA yield can be improved significantly by following the isolation method for total RNA and its fractions included in Ambion’s MirVana PARIS kit, but only if using a special approach and modifying the organic extraction step. Compared to others, the methods supplied with commercially available kits at the time of researching this paper require only one organic extraction. This simple but, as it turned out, very useful modification makes it possible to access previously unavailable material. Potential advantages of this modification include a more complete profiling of small non-coding RNAs and a broader access to small sample volumes, as a rule, access to human biological fluids which can be prepared for RNA sequencing on the Illumina platform.

"],"dc.abstract.ru":["

Существует ряд вопросов при выборе методик для экспериментов, связанных с секвенированием нового поколения (Next-Generation Sequencing). С одной стороны, во время работы с экстракцией РНК добавленные реагенты и их остатки часто могут ингибировать чувствительные химические вещества, с помощью которых осуществляется последовательный синтез для секвенирования. С другой, обработка данных с применением различного программного обеспечения для анализа результатов также может влиять на результаты секвенирования. Текущая работа будет описывать поэтапно, как готовятся образцы из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования малых РНК, в частности некодирующих. Что касается способов экстракции или изоляции РНК, мы обнаружили, что малый выход РНК может быть значительно увеличен, по методу изоляции тотальной РНК и ее фракций, включенных в набор MirVana PARIS Kit от Ambion, при специальном подходе и модификации этапа органической экстракции. По сравнению с другими методиками поставляемые с имеющимися в продаже наборами на момент этой работы требуют только одной органической экстракции. Эта простая, но, как оказалось, весьма полезная модификация позволяет получить доступ к ранее недоступному материалу. Потенциальными преимуществами этой модификации являются более полное профилирование малых РНК, а также более широкий доступ к небольшим объемам образцов, как правило, доступ к биологическим жидкостям человека, которые могут быть приготовлены для секвенирования РНК на платформе Illumina.

"],"dc.pages":["80-86"],"author":["О. А. Бейлерли","O. A. Beylerli","А. Т. Бейлерли","A. T Beylerli","И. Ф. Гареев","I. F. Garaev"],"author_keyword":["О. А. Бейлерли","O. A. Beylerli","А. Т. Бейлерли","A. T Beylerli","И. Ф. Гареев","I. F. Garaev"],"author_ac":["о. а. бейлерли\n|||\nО. А. Бейлерли","o. a. beylerli\n|||\nO. A. Beylerli","а. т. бейлерли\n|||\nА. Т. Бейлерли","a. t beylerli\n|||\nA. T Beylerli","и. ф. гареев\n|||\nИ. Ф. Гареев","i. f. garaev\n|||\nI. F. Garaev"],"author_filter":["о. а. бейлерли\n|||\nО. А. Бейлерли","o. a. beylerli\n|||\nO. A. Beylerli","а. т. бейлерли\n|||\nА. Т. Бейлерли","a. t beylerli\n|||\nA. T Beylerli","и. ф. гареев\n|||\nИ. Ф. Гареев","i. f. garaev\n|||\nI. F. Garaev"],"dc.author.name":["О. А. Бейлерли","O. A. Beylerli","А. Т. Бейлерли","A. T Beylerli","И. Ф. Гареев","I. F. Garaev"],"dc.author.name.ru":["О. А. Бейлерли","А. Т. Бейлерли","И. Ф. Гареев"],"dc.author.name.en":["O. A. Beylerli","A. T Beylerli","I. F. Garaev"],"dc.author.affiliation":["Башкирский государственный медицинский университет","Bashkir State Medical University","Башкирский государственный медицинский университет","Bashkir State Medical University","Башкирский государственный медицинский университет","Bashkir State Medical University"],"dc.author.affiliation.ru":["Башкирский государственный медицинский университет","Башкирский государственный медицинский университет","Башкирский государственный медицинский университет"],"dc.author.affiliation.en":["Bashkir State Medical University","Bashkir State Medical University","Bashkir State Medical University"],"dc.issue.number":["1"],"dc.issue.volume":["9"],"dc.origin":["https://surgonco.elpub.ru/jour/article/view/367"],"dc.fullRISC":["Введение\nИсследователи, которые хотят выполнить секвенирование нового поколения (NGS), должны решить ряд\nпроблем, связанных со способами и методами подготовки образцов. Способы экстракции РНК из тканей\nили клеток, создание базы данных для секвенирования\nи типов секвенирования, которые будут выполняться,\nстановятся решающими факторами в дизайне экспериментальной работы [1]. В частности, для секвенирования различных классов молекул РНК, по крайней мере\nчастично, определяются и упорядочиваются по их размеру. Микро-РНК (miRNAs, 18–22 нуклеотида), малые\nинтерферирующие РНК (siRNAs, 20–25 нуклеотидов)\nи PIWI-взаимодействующие РНК (piRNA, приблизительно 30 нуклеотидов) являются разновидностями\nмалых некодирующих РНК, участвующих в последовательном ингибировании экспрессии генов на посттранскрипционном уровне [2]. Хотя в настоящее время малые РНК известны как наименьший функциональный\nкласс, но их биологическая значимость для регулирования экспрессии генов все еще изучается на протяжении\n20 лет с момента их открытия [3]. С недавних пор NGS\nиспользуется для получения небольших дифференциальных профилей экспрессии РНК для изучения этапов\nразвития тканей, типов тканей и патологических состояний, таких как онкология, сердечно-сосудистые заболевания и психические расстройства с потенциалом\nдля поиска новых биомаркеров [4–7].\nДо недавнего времени считалось, что способы экстракции РНК из тканей позволяли извлекать все виды РНК:\nпримерно от длинных до малых РНК, которые включают\nкодирующие РНК (мРНК), длинные некодирующие РНК\n(lncRNA), транспортные РНК (тРНК), малые ядрышковые\nРНК (snoRNA), PIWI -взаимодействующие РНК (piRNA)\nи микро-РНК (miRNA) [2]. Экстракция всех видов РНК\nподразумевается в описании многих коммерчески доступных наборов и методов, описывающих изоляцию\nтотальной РНК. Фактически они используются для методов, которые вообще не извлекают малые РНК, но имеются такие наборы, которые основываются на использовании мини-колонок с диоксидом кремния (SiO2\n), которые\nи проводят экстракцию малых РНК. Кроме того, в ряде\nнаборов использовались соотношения солей и спирта,\nне достаточные для изоляции малых РНК из образцов.\nВ настоящее время существует множество коммерчески\nдоступных наборов для экстракции малых РНК. Хотя методики имеют некоторые отличия, большинство из них\nиспользуют тиоцианат гуанидиния для денатурирования\nРНКаз и белков с последующей экстракцией РНК с фенол-хлороформом [8, 9]. Систематическое тестирование\nпоказало, что производительность наборов для изоляции\nРНК варьируется в зависимости от типов образцов [10].\nРяд наборов лучше подходят к конкретным видам образцов, чем к другим. Например, соединительная ткань,\nтакая как мышечная, должна обрабатываться иначе, чем\nбогатая липидами нервная ткань. Лучшим вариантом может быть выбор комплекта, специально разработанного\nдля решения проблем с экстракцией РНК для конкретного типа ткани.\nИз трех лучших наборов для изоляции тотальной РНК\nи ее фракций набор MaxRecovery BiooPure RNA (Bio\nScientific, Austin, TX, USA) не был выбран, так как проявлялась некоторая потеря РНК в отдельных образцах.\nСтандартный набор MirVana Kit (Life Technologies), который в своей методике не предлагает исследователям\nвозможность выделения белка из исходного лизата, хорошо работает, но не был выбран, потому что первый\nбуфер добавляется в соотношении 10:1 к объему образца. Таким образом, для каждого образца объемом 1 мл\nпотребуется более 50 отдельных этапов центрифугирования, что делает этот метод логически необоснованным для выделения РНК из биологических жидкостей.\nНабор MirVana PARIS (выделения белка и РНК) Kit (Life\nTechnologies) наилучшим образом обеспечивал выход\nРНК вследствие легкости применения при систематическом сравнении с другими коммерчески доступными\nнаборами и методами [10].\nНабор MirVana PARIS включает использование запатентованного лизирующего буфера с β-меркаптоэтанолом,\nкоторый служит для денатурирования белков биологических жидкостей, экстракции РНК фенол-хлороформом из образца, с высоким содержанием белка,\nлипидов и ДНК, с последующей очисткой на спиртовой/колоночной основе перед элюированием РНК.\nВ этой работе мы описываем метод экстракции малых\nРНК длиной менее 200 нуклеотидов из биологических\nжидкостей человека и его оптимизацию по экстракции\nмалых РНК длиной менее 200 нуклеотидов из биологических жидкостей человека [10]. Основные изменения\nв дополнение к стандартному протоколу, предоставленному изготовителем, включают повторное извлечение\nРНК вместо удаления остаточного фенол-хлороформа\nпутем добавления воды, свободной от РНКаз, ремиксации и отделения другого объема раствора. Хотя уровень для лучшей экстракции малых РНК с использованием модификаций, предложенных в этой работе, будет\nварьироваться в зависимости от конкретного набора,\nк которому применяется эта методика, было показано,\nчто он обладает кроссплатформенной применимостью\n[10]. Наборы, использующие кислота-фенол-хлороформную основу, могут быть полезны с некоторыми\nдополнениями для набора mirVana PARIS. Выход РНК\nиз всех образцов, которые были протестированы, получался из второй водной экстракции из остаточного кислота-фенол-хлороформного материала [10]. Поскольку\nсовременные методы NGS для малых РНК выполняются отдельно от РНК с более длинной цепочкой нуклеотидов, тот факт, что лучшие наборы для изоляции\nмалых или больших молекул РНК различны, не представляет проблем на момент этой работы.\nМатериалы\n1. MirVana PARIS Kit от Ambion (см. примечание 1):\n- раствор для промывки 1;\n- раствор для промывки 2/3 (см. примечание 2);\n- сборные пробирки и фильтровальные картриджи\n(см. примечание 3);\n- буфер для лизиса клеток (см. примечание 4); \n- 2 денатурирующий раствор, тиоцианат гуанидинияфенол-хлороформная основа (см. примечание 5);\n- раствор для элюирования (см. примечание 6).\n2. Абсолютный этиловый спирт (95,6–100 %) ACSкласса или лучше (см. примечание 7).\n3. β-меркаптоэтанол.\n4. 7 M ацетат аммония.\n5. Криопробирки 2 мл (для образцов).\n6. Бенчтоп-центрифуга (скорость не менее 800 об/мин).\n7. Бокс биологической безопасности, класс II.\n8. Вытяжной шкаф с отрицательным воздушным потоком (см. примечание 8).\n9. Центрифуга, способная поддерживать комнатную\nтемпературу и центрифугировать по меньшей мере\n10 000 об/мин, используя ротор, способный удерживать\nконические пробирки 15 мл (см. примечание 9).\n10. Лабораторный нагревательный блок, установленный на 95–100 °C.\n11. Орбитально-качающийся шейкер (см. примечание 10).\n12. Пробирки 1,5 мл, не содержащие РНКаз (см. примечание 11).\n13. Салфетки или растворы в виде спрея для обеззараживания РНКаз (см. примечание 12).\nМетоды\nПриготовление образцов\nПосле взятия биологической жидкости (цереброспинальная жидкость) помещаем образцы в криопробирки\n2 мл, их необходимо быстро заморозить в жидком азоте\nлибо в суспензии абсолютного этанола с сухим льдом,\nчтобы сохранить профиль РНК (см. примечание 13).\nИспользование шкафа биобезопасности требуется\nпри обращении с биологическими образцами для защиты исследователей от воздействия патогенов человека.\nПодготовка набора MirVana PARIS Kit\n1. Инкубируем компоненты mirVana PARISKit при комнатной температуре (см. примечание 14).\n2. Добавляем 21 мл 100 % этанола в раствор для промывки РНК (см. примечание 7).\n3. Добавляем 40 мл 100 % этанола в раствор для промывки 2/3 (см. примечание 7 и 15).\n4. Добавляем 375 мкл β-меркаптоэтанол в 2 денатурирующий раствор см. примечание 16).\n5. Добавляем аликвоту 1 мл воды, свободной от РНКаз\n(см. примечание 6), в микроцентрифужные пробирки\n1,5 мл и помещаем их на нагревательный блок, установленный на 95 °C. Эта предварительно нагретая вода будет использоваться для элюирования РНК из мембран\nмини-колонок на конечной стадии (см. примечание 17).\nИзмененная методика протокола MirVana PARIS Kit\n1. Добавляем равный объем 2 денатурирующего раствора к замороженному образцу (цереброспинальная\nжидкость) (см. примечание 18).\n2. Помещаем образец на орбитально-качающийся шейкер при комнатной температуре до полного оттаивания\nи смешивания (см. примечание 10).\n3. Инкубируем в течение 10 мин при комнатной температуре.\n4. Добавляем равные объемы тиоцианат гуанидиния,\nфенола и хлороформа (кислотно-фенол-хлороформная\nоснова) (см. примечание 19).\n5. Смешиваем на вортексе в течение 30 сек.\n6. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 5 мин\nпри комнатной температуре (см. примечание 20).\n7. Осторожно снимаем пробирки с центрифуги, и нужно убедиться, что имеются верхний (водный) слой\nи нижний (органический) слой.\n8. Переносим приблизительно 90 % верхней водной\nфазы от этой первой экстракции в чистую пробирку 2 мл\nи определяем объем. Позаботьтесь о том, чтобы мениск\nоставшегося объема водной фазы не касался интерфазы\n(см. примечание 21). Откладываем в сторону.\n9. В оставшийся органический остаток добавляем объем\nводы, свободной от РНК, эквивалентный водному объему, который был просто перенесен в новую пробирку.\n10. Смешиваем на вортексе в течение 30 сек.\n11. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 5 мин\nпри комнатной температуре.\n12. Переносим приблизительно 90 % верхней водной\nфазы этой второй экстракции в ту же самую пробирку, которая содержит водный объем от первой водной\nфазы (белки и РНК) (см. примечание 21). Остальная\nчасть с органической фазой теперь может быть выброшена (см. примечание 5).\n13. Добавляем 1,5 объема 100 % этанола в общий объем полученной жидкости, рассчитанный от удаленного\nиз первого и второго органических экстрактов (см. примечание 7).\n14. Инвертируем 10 раз для смешивания и даем раствору инкубироваться при комнатной температуре в течение 10 мин.\n15. Добавляем 700 мкл полученной жидкости в миниколонки и центрифугируем при 800 об/мин при комнатной температуре (см. примечание 22), сбрасываем\nполученную жидкость из сборной пробирки и повторяем шаги, пока не закончится исследуемый образец\n(см. примечание 3).\n16. Добавляем 700 мкл подготовленного промывочного раствора 1 в мини-колонки и центрифугируем\nпри 800 об/мин в течение 30 сек. для пропускания раствора через мембрану мини-колонок (см. примечания 23 и 22). Сбрасываем полученную жидкость из сборной пробирки (см. примечание 3).\n17. Добавляем 500 мкл подготовленного промывочного раствора 2/3 в мини-колонки (см. примечание 24)\nи центрифугируем при 800 об/мин в течение 30 сек.\n(см. примечание 22). Сбрасываем полученную жидкость из сборной пробирки.\n18. Повторяем шаг 17.\n19. Без применения каких-либо других растворов мини-колонки после центрифугирования и их пустые\nсборные пробирки в течение 30 сек. высушиваются\nот остаточного этанола.\n20. Перемешиваем мини-колонки в новые сборные\nпробирки (см. примечание 25). 21. Добавляем 100 мкл 95 °C (см. примечание 26) воды, свободной от РНКаз, (см. примечание 6) в мини-колонки и инкубируем при комнатной температуре в течение 1 минуты.\n22. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 1 мин\nдля элюирования РНК через мембрану мини-колонок\n(см. примечание 27).\n23. Повторяем шаги 21 и 22.\n24. Фильтрующий компонент мини-колонок можно\nвыбросить, поскольку РНК элюируется из фильтра\nи находится в сборной пробирке.\n25. Центрифугируем данные образцы с РНК на максимальной скорости в течение 1 мин до выпадения осадка.\n26. Избегая осадка, переносим РНК из данной пробирки\nв новую пробирку. Приступаем к осаждению этанолом\nдля подготовки малых РНК к NGS (см. примечание 27).\n27. Добавляем 0,5 объема 7 М ацетата аммония до конечной концентрации 2–2,5 М и хорошо смешиваем\n(см. примечание 28).\n28. Добавляем 4 объема от объема РНК абсолютного\nспирта и хорошо смешиваем. Инкубируем полученный\nобразец при температуре -20 °C с 4 до 12 часов.\n29. Центрифугируем при 16,000 об/мин в течение\n30 мин. при 4 °C для осаждения РНК.\n30. Промываем полученные гранулы дважды 80 %\nспиртом.\n31. Ресуспендируем гранулы РНК в объеме воды, свободной от РНКаз, следуя стандартному протоколу производителя.\nПримечания\n1. Комплект MirVana PARIS рассчитан на 40 реакций\nпри использовании протокола, предоставленного производителем, и предлагаемых тканей (см. Руководство\nпользователя Ambion mirVana PARIS Kit). С модифицированным протоколом, описанным здесь, этот комплект\nпредставлен приблизительно для 20 мл биожидкости.\n2. 2/3 промывочного раствора используется для второй и третьей промывки колонки на основе диоксида\nкремния, содержащей иммобилизованную РНК.\n3. Фильтр мини-колонки и ее сборная пробирка будут\nповторно использоваться на всех этапах в этом модифицированном протоколе, за исключением последнего,\nв котором завершена изоляция и очистка РНК.\n4. Буфер для лизиса клеток включен в список реагентов, однако он не будет использоваться для текущего\nметода, который был разработан для образцов биологических жидкостей.\n5. Кислота-фенол-хлороформная основа является едкой, поэтому при обращении и утилизации необходимо\nсоблюдать осторожность. Необходимы средства индивидуальной защиты и использование вытяжного шкафа.\n6. В текущем протоколе для элюирования тотальной РНК и ее фракций используют воду, свободную\nот РНКаз.\n7. Поскольку соотношение этанола и водного буфера\nважно независимо от того, растворена ли РНК, или выпала в осадок в растворе, крайне важно использовать\nабсолютный этанол ACS-класса (ACS — Американское\nхимическое общество) или лучше при приготовлении\nспиртовых буферных растворов. Каждый раз, когда\nобезвоженный этанол подвергается воздействию окружающей среды, в нем растворяется вода из окружающей среды, что впоследствии уменьшает содержание\nэтанола в растворе ниже по потоку.\n8. Из-за соображений безопасности, за исключением последнего шага, весь протокол должен выполняться в вытяжном шкафу с отрицательным воздушным потоком,\nпредназначенным для летучих химических веществ.\n9. Важным аспектом молекулярной функции всех\nбуферов и растворов является их pH. Поскольку температура оказывает существенное влияние на рН, ее\nследует контролировать. Все описанные здесь шаги\nвыполняются при комнатной температуре, если\nне указано иное. Однако центрифугирование может\nувеличить температуру центрифугируемого образца.\nТаким образом, центрифуги, используемые на этапах\nцентрифугирования без мини-колонок, должны быть\nустановлены на стандартную температуру окружающей среды 25 °C. Для кратковременных этапов центрифугирования, например для пропускания жидкости\nчерез мини-колонки, центрифуга с контролируемой\nтемпературой не требуется.\n10. Не важно, при какой скорости используется стандартный лабораторный орбитально-качающийся шейкер, если он позволяет тщательно перемешивать замороженные образцы в денатурирующем растворе.\n11. Мы обнаружили, что сборные пробирки, поставляемые с комплектом mirVana PARIS Kit, не всегда плотно закрывались. Кроме того, использование пробирок\nс неплотно закрывающимися крышками приводит к испарению и уменьшает остаточный материал РНК, находящийся в сборной пробирке. Поэтому, как только РНК элюируется из мини-колонки, ее следует перенести в плотно\nзакрывающуюся стерильную пробирку без РНКаз.\n12. Очистим рабочий стол и все оборудование, которое\nбудет использоваться для экстракции РНК, с помощью\nрастворов-дезактиваторов РНКаз или салфеток в соответствии с рекомендациями производителя для этих\nпродуктов. Следует принять общие меры предосторожности, чтобы свести к минимуму возможное воздействие РНКаз на РНК.\n13. Хотя малые РНК относительно стабильны в биологических жидкостях [12], обрабатывая образцы одинаковым способом, каждый раз можно будет гарантировать минимизацию смещения сбора и сохранить общий\nпрофиль тотальной РНК. В замороженных образцах\nРНКазы неактивны из-за низкой температуры, которая\nне позволяет воде находиться в жидкой форме, необходимой для того, чтобы эти ферменты меняли структуру\nРНК. Образцы оттаивают в присутствии 2 денатурирующего раствора, чтобы гарантировать, что РНКазы\nбудут денатурированы, поэтому они необратимо инактивируются [11].\n14. Набор MirVana PARIS поставляется при комнатной\nтемпературе, а компоненты хранятся либо при комнатной температуре, либо при температуре 4 °C в соответствии с правилами производителя. Для использования\nв обычном режиме или в текущем модифицированном протоколе перед использованием компонентов\nMirVana Paris Kit необходимо довести их до комнатной\nтемпературы.\n15. В промывочном растворе 2/3 может образовываться осадок белого цвета, но это не имеет никакого значения, и его следует оставить в бутылке при использовании этого раствора.\n16. 2 денатурирующий раствор образует осадок при рекомендуемой температуре хранения 4 °C. После прогрева до комнатной температуры нужно осмотреть,\nостался ли осадок в растворе. Если присутствует твердый белый осадок, нужно плотно закрыть бутылку\nи при 37 °C перемешивать его до полного растворения.\n17. Для обеспечения герметичности пробирок и исключения испарения раствора под воздействием повышенной температуры и давления при центрифугировании можно использовать алюминиевую фольгу.\n18. Оцениваем объем биологического образца. Если\nпробирка для образцов заполнена больше, чем наполовину, нужно предотвратить добавление равного объема 2 денатурирующего раствора и добавить только\n1/10 объема 2 денатурирующего раствора, энергично\nперемешивая до тех пор, пока замороженный образец\nне будет слегка разморожен. Перенесите этот образец\nи остаточный раствор в большую пробирку, где есть\nоставшийся 2 денатурирующий раствор.\n19. Небольшой объем водного буфера покрывает органическую кислотно-фенол-хлороформную основу. При\nиспользовании этого реагента убедитесь, что присутствуют два разных слоя. Следует избегать взбалтывания этого раствора, чтобы слои не смешивались. Если\nраствор выглядит мутным или присутствуют пузырьки\nвоздуха, следует подождать осаждения до тех пор, пока\nдва слоя не будут заметно разделены. При использовании этого раствора обязательно удалите кислотно-фенол-хлороформную основу из-под водного буферного\nслоя. Когда объем раствора уменьшится, обязательно\nпроконтролируйте, что вы удалили эту основу, а не вышележащий водный буфер.\n20. Стадия фазового разделения фенол-хлороформа\nвключает центрифугирование относительно большого\nобъема. Поэтому рекомендуется, чтобы ротор для центрифуги был с регулируемой температурой (см. примечание 9) и был совместим с центрифужными пробирками. Пробирки должны быть способны удерживать\nраствор в 5 раз больше своего объема.\n21. В зависимости от образцов (биологических жидкостей) белая интерфаза может и не наблюдаться, особенно для второй экстракции. При тщательном осмотре\nфазы должны быть видны и не должны смешиваться\nпри пипетировании верхнего водного объема.\n22. Мини-колонки из набора MirVana PARIS были разработаны для протокола изготовителя. С помощью\nмодифицированного метода большие объемы, чем первоначально предполагалось, проходят через весь столбец мини-колонок. Поскольку РНК будет связываться\nс мембраной (диоксид кремния) столбца мини-колонок, лучше всего тщательно поддерживать целостность\nстолбца. Поэтому максимальная скорость центрифугирования, рекомендуемая для пропускания водного раствора экстракции/этанола, составляет 800 g.\n23. Готовый промывочный раствор 1содержит 21 мл\n100 % этанола.\n24. Готовый промывочный раствор 2/3 содержит 40 мл\n100 % этанола.\n25. Чтобы предотвратить проникновение высушенного остаточного материала в свежий резервуар пробирки, очистите внешнюю поверхность колонки фильтра,\nиспользуя протирание раствором 70 % этанола, но избегайте смачивания фильтра.\n26. Разогреваем воду, свободную от РНКаз, на тепловом блоке до 95 °C и используем эту воду для элюирования РНК из мембраны мини-колонок. Чтобы учесть,\nчто при этой температуре происходит испарение, нужно удвоить объем воды, которая будет использоваться,\nа также она должна быть предварительно нагрета.\n27. Если РНК будет использоваться для любых других\nметодов секвенирования, помимо малых РНК, может\nпотребоваться обработка ДНК-образца.\n28. Осаждение РНК этанолом должно всегда происходить с добавлением солевых растворов, и они должны\nбыть тщательно перемешаны перед добавлением спирта.\nОбсуждение\nМы протестировали различные коммерчески доступные\nнаборы для извлечения РНК и обнаружили, что некоторые из них были более эффективными при выделении\nмалых РНК из биологических жидкостей, чем другие.\nТакже были проверены модификации протоколов, сделанных другими исследователями, для более высокого\nвыхода РНК [13]. Лучшие условия для получения высокого выхода малых РНК из биожидкостей описаны в этой\nметодике, так как мы считаем, что она имеет ценность\nдля исследователей, которые планируют работать с NGS.\nНастоящее исследование специально было разработано\nи протестировано для изоляции малых РНК из цереброспинальной жидкости человека для последующей работы с NGN на платформе Illumina (Illumina, San Fransico,\nCA, USA). Также метод может быть дополнительно применен к образцам слюны и мочи человека [14].\nОписанный здесь метод был протестирован и показал,\nчто он улучшает восстановление или выделение малых\nРНК из цереброспинальной жидкости. Однако этот метод не ограничивается этим типом образцов и может\nразумно применяться к другим типам биологических\nжидкостей [15]. Поскольку каждый тип выборки может\nсоздавать определенные проблемы, мы настоятельно\nрекомендуем тестировать различные методы для каждого конкретного типа образца, т. е. типа ткани.\nДоказана роль секвенирования следующего поколения\nв дифференциальной диагностике сложных новообразований. Acosta и др. оценили потенциальное применение NGS в диагностике этих редких новообразований\n[16]. В исследование были включены четыре новообразования. Два были диагностированы как смешанная\nаденонейроэндокринная карцинома желчного пузыря\nи метастатический папиллярный рак щитовидной железы с плоскоклеточной дедифференцировкой, а два были интерпретированы как аденокарцинома пищевода в аденокарциному легких и мелкоклеточная карцинома легкого на/в менингеальную меланому. Это исследование\nиллюстрирует роль NGS в дифференциальной диагностике редких новообразований как дополнения к световой микроскопии и иммуногистохимии.\nЗаключение\nВ этой статье мы описали методику для экстракции малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения, которую сочли полезной при исследованиях данных типов\nРНК в качестве потенциальных биомаркеров. Как указано выше, подготовка образцов, выбор реагентов —\nнемаловажные факторы, учитывая текущую нехватку\nзнаний об их влиянии на последующее секвенирование\nнового поколения малых РНК. Кроме того, тщательно\nпостроенный план эксперимента, связанный с выбором типов образцов и техники экстракции малых РНК,\nважен для получения хороших результатов в работе\nс секвенированием нового поколения."],"dc.fullRISC.ru":["Введение\nИсследователи, которые хотят выполнить секвенирование нового поколения (NGS), должны решить ряд\nпроблем, связанных со способами и методами подготовки образцов. Способы экстракции РНК из тканей\nили клеток, создание базы данных для секвенирования\nи типов секвенирования, которые будут выполняться,\nстановятся решающими факторами в дизайне экспериментальной работы [1]. В частности, для секвенирования различных классов молекул РНК, по крайней мере\nчастично, определяются и упорядочиваются по их размеру. Микро-РНК (miRNAs, 18–22 нуклеотида), малые\nинтерферирующие РНК (siRNAs, 20–25 нуклеотидов)\nи PIWI-взаимодействующие РНК (piRNA, приблизительно 30 нуклеотидов) являются разновидностями\nмалых некодирующих РНК, участвующих в последовательном ингибировании экспрессии генов на посттранскрипционном уровне [2]. Хотя в настоящее время малые РНК известны как наименьший функциональный\nкласс, но их биологическая значимость для регулирования экспрессии генов все еще изучается на протяжении\n20 лет с момента их открытия [3]. С недавних пор NGS\nиспользуется для получения небольших дифференциальных профилей экспрессии РНК для изучения этапов\nразвития тканей, типов тканей и патологических состояний, таких как онкология, сердечно-сосудистые заболевания и психические расстройства с потенциалом\nдля поиска новых биомаркеров [4–7].\nДо недавнего времени считалось, что способы экстракции РНК из тканей позволяли извлекать все виды РНК:\nпримерно от длинных до малых РНК, которые включают\nкодирующие РНК (мРНК), длинные некодирующие РНК\n(lncRNA), транспортные РНК (тРНК), малые ядрышковые\nРНК (snoRNA), PIWI -взаимодействующие РНК (piRNA)\nи микро-РНК (miRNA) [2]. Экстракция всех видов РНК\nподразумевается в описании многих коммерчески доступных наборов и методов, описывающих изоляцию\nтотальной РНК. Фактически они используются для методов, которые вообще не извлекают малые РНК, но имеются такие наборы, которые основываются на использовании мини-колонок с диоксидом кремния (SiO2\n), которые\nи проводят экстракцию малых РНК. Кроме того, в ряде\nнаборов использовались соотношения солей и спирта,\nне достаточные для изоляции малых РНК из образцов.\nВ настоящее время существует множество коммерчески\nдоступных наборов для экстракции малых РНК. Хотя методики имеют некоторые отличия, большинство из них\nиспользуют тиоцианат гуанидиния для денатурирования\nРНКаз и белков с последующей экстракцией РНК с фенол-хлороформом [8, 9]. Систематическое тестирование\nпоказало, что производительность наборов для изоляции\nРНК варьируется в зависимости от типов образцов [10].\nРяд наборов лучше подходят к конкретным видам образцов, чем к другим. Например, соединительная ткань,\nтакая как мышечная, должна обрабатываться иначе, чем\nбогатая липидами нервная ткань. Лучшим вариантом может быть выбор комплекта, специально разработанного\nдля решения проблем с экстракцией РНК для конкретного типа ткани.\nИз трех лучших наборов для изоляции тотальной РНК\nи ее фракций набор MaxRecovery BiooPure RNA (Bio\nScientific, Austin, TX, USA) не был выбран, так как проявлялась некоторая потеря РНК в отдельных образцах.\nСтандартный набор MirVana Kit (Life Technologies), который в своей методике не предлагает исследователям\nвозможность выделения белка из исходного лизата, хорошо работает, но не был выбран, потому что первый\nбуфер добавляется в соотношении 10:1 к объему образца. Таким образом, для каждого образца объемом 1 мл\nпотребуется более 50 отдельных этапов центрифугирования, что делает этот метод логически необоснованным для выделения РНК из биологических жидкостей.\nНабор MirVana PARIS (выделения белка и РНК) Kit (Life\nTechnologies) наилучшим образом обеспечивал выход\nРНК вследствие легкости применения при систематическом сравнении с другими коммерчески доступными\nнаборами и методами [10].\nНабор MirVana PARIS включает использование запатентованного лизирующего буфера с β-меркаптоэтанолом,\nкоторый служит для денатурирования белков биологических жидкостей, экстракции РНК фенол-хлороформом из образца, с высоким содержанием белка,\nлипидов и ДНК, с последующей очисткой на спиртовой/колоночной основе перед элюированием РНК.\nВ этой работе мы описываем метод экстракции малых\nРНК длиной менее 200 нуклеотидов из биологических\nжидкостей человека и его оптимизацию по экстракции\nмалых РНК длиной менее 200 нуклеотидов из биологических жидкостей человека [10]. Основные изменения\nв дополнение к стандартному протоколу, предоставленному изготовителем, включают повторное извлечение\nРНК вместо удаления остаточного фенол-хлороформа\nпутем добавления воды, свободной от РНКаз, ремиксации и отделения другого объема раствора. Хотя уровень для лучшей экстракции малых РНК с использованием модификаций, предложенных в этой работе, будет\nварьироваться в зависимости от конкретного набора,\nк которому применяется эта методика, было показано,\nчто он обладает кроссплатформенной применимостью\n[10]. Наборы, использующие кислота-фенол-хлороформную основу, могут быть полезны с некоторыми\nдополнениями для набора mirVana PARIS. Выход РНК\nиз всех образцов, которые были протестированы, получался из второй водной экстракции из остаточного кислота-фенол-хлороформного материала [10]. Поскольку\nсовременные методы NGS для малых РНК выполняются отдельно от РНК с более длинной цепочкой нуклеотидов, тот факт, что лучшие наборы для изоляции\nмалых или больших молекул РНК различны, не представляет проблем на момент этой работы.\nМатериалы\n1. MirVana PARIS Kit от Ambion (см. примечание 1):\n- раствор для промывки 1;\n- раствор для промывки 2/3 (см. примечание 2);\n- сборные пробирки и фильтровальные картриджи\n(см. примечание 3);\n- буфер для лизиса клеток (см. примечание 4); \n- 2 денатурирующий раствор, тиоцианат гуанидинияфенол-хлороформная основа (см. примечание 5);\n- раствор для элюирования (см. примечание 6).\n2. Абсолютный этиловый спирт (95,6–100 %) ACSкласса или лучше (см. примечание 7).\n3. β-меркаптоэтанол.\n4. 7 M ацетат аммония.\n5. Криопробирки 2 мл (для образцов).\n6. Бенчтоп-центрифуга (скорость не менее 800 об/мин).\n7. Бокс биологической безопасности, класс II.\n8. Вытяжной шкаф с отрицательным воздушным потоком (см. примечание 8).\n9. Центрифуга, способная поддерживать комнатную\nтемпературу и центрифугировать по меньшей мере\n10 000 об/мин, используя ротор, способный удерживать\nконические пробирки 15 мл (см. примечание 9).\n10. Лабораторный нагревательный блок, установленный на 95–100 °C.\n11. Орбитально-качающийся шейкер (см. примечание 10).\n12. Пробирки 1,5 мл, не содержащие РНКаз (см. примечание 11).\n13. Салфетки или растворы в виде спрея для обеззараживания РНКаз (см. примечание 12).\nМетоды\nПриготовление образцов\nПосле взятия биологической жидкости (цереброспинальная жидкость) помещаем образцы в криопробирки\n2 мл, их необходимо быстро заморозить в жидком азоте\nлибо в суспензии абсолютного этанола с сухим льдом,\nчтобы сохранить профиль РНК (см. примечание 13).\nИспользование шкафа биобезопасности требуется\nпри обращении с биологическими образцами для защиты исследователей от воздействия патогенов человека.\nПодготовка набора MirVana PARIS Kit\n1. Инкубируем компоненты mirVana PARISKit при комнатной температуре (см. примечание 14).\n2. Добавляем 21 мл 100 % этанола в раствор для промывки РНК (см. примечание 7).\n3. Добавляем 40 мл 100 % этанола в раствор для промывки 2/3 (см. примечание 7 и 15).\n4. Добавляем 375 мкл β-меркаптоэтанол в 2 денатурирующий раствор см. примечание 16).\n5. Добавляем аликвоту 1 мл воды, свободной от РНКаз\n(см. примечание 6), в микроцентрифужные пробирки\n1,5 мл и помещаем их на нагревательный блок, установленный на 95 °C. Эта предварительно нагретая вода будет использоваться для элюирования РНК из мембран\nмини-колонок на конечной стадии (см. примечание 17).\nИзмененная методика протокола MirVana PARIS Kit\n1. Добавляем равный объем 2 денатурирующего раствора к замороженному образцу (цереброспинальная\nжидкость) (см. примечание 18).\n2. Помещаем образец на орбитально-качающийся шейкер при комнатной температуре до полного оттаивания\nи смешивания (см. примечание 10).\n3. Инкубируем в течение 10 мин при комнатной температуре.\n4. Добавляем равные объемы тиоцианат гуанидиния,\nфенола и хлороформа (кислотно-фенол-хлороформная\nоснова) (см. примечание 19).\n5. Смешиваем на вортексе в течение 30 сек.\n6. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 5 мин\nпри комнатной температуре (см. примечание 20).\n7. Осторожно снимаем пробирки с центрифуги, и нужно убедиться, что имеются верхний (водный) слой\nи нижний (органический) слой.\n8. Переносим приблизительно 90 % верхней водной\nфазы от этой первой экстракции в чистую пробирку 2 мл\nи определяем объем. Позаботьтесь о том, чтобы мениск\nоставшегося объема водной фазы не касался интерфазы\n(см. примечание 21). Откладываем в сторону.\n9. В оставшийся органический остаток добавляем объем\nводы, свободной от РНК, эквивалентный водному объему, который был просто перенесен в новую пробирку.\n10. Смешиваем на вортексе в течение 30 сек.\n11. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 5 мин\nпри комнатной температуре.\n12. Переносим приблизительно 90 % верхней водной\nфазы этой второй экстракции в ту же самую пробирку, которая содержит водный объем от первой водной\nфазы (белки и РНК) (см. примечание 21). Остальная\nчасть с органической фазой теперь может быть выброшена (см. примечание 5).\n13. Добавляем 1,5 объема 100 % этанола в общий объем полученной жидкости, рассчитанный от удаленного\nиз первого и второго органических экстрактов (см. примечание 7).\n14. Инвертируем 10 раз для смешивания и даем раствору инкубироваться при комнатной температуре в течение 10 мин.\n15. Добавляем 700 мкл полученной жидкости в миниколонки и центрифугируем при 800 об/мин при комнатной температуре (см. примечание 22), сбрасываем\nполученную жидкость из сборной пробирки и повторяем шаги, пока не закончится исследуемый образец\n(см. примечание 3).\n16. Добавляем 700 мкл подготовленного промывочного раствора 1 в мини-колонки и центрифугируем\nпри 800 об/мин в течение 30 сек. для пропускания раствора через мембрану мини-колонок (см. примечания 23 и 22). Сбрасываем полученную жидкость из сборной пробирки (см. примечание 3).\n17. Добавляем 500 мкл подготовленного промывочного раствора 2/3 в мини-колонки (см. примечание 24)\nи центрифугируем при 800 об/мин в течение 30 сек.\n(см. примечание 22). Сбрасываем полученную жидкость из сборной пробирки.\n18. Повторяем шаг 17.\n19. Без применения каких-либо других растворов мини-колонки после центрифугирования и их пустые\nсборные пробирки в течение 30 сек. высушиваются\nот остаточного этанола.\n20. Перемешиваем мини-колонки в новые сборные\nпробирки (см. примечание 25). 21. Добавляем 100 мкл 95 °C (см. примечание 26) воды, свободной от РНКаз, (см. примечание 6) в мини-колонки и инкубируем при комнатной температуре в течение 1 минуты.\n22. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 1 мин\nдля элюирования РНК через мембрану мини-колонок\n(см. примечание 27).\n23. Повторяем шаги 21 и 22.\n24. Фильтрующий компонент мини-колонок можно\nвыбросить, поскольку РНК элюируется из фильтра\nи находится в сборной пробирке.\n25. Центрифугируем данные образцы с РНК на максимальной скорости в течение 1 мин до выпадения осадка.\n26. Избегая осадка, переносим РНК из данной пробирки\nв новую пробирку. Приступаем к осаждению этанолом\nдля подготовки малых РНК к NGS (см. примечание 27).\n27. Добавляем 0,5 объема 7 М ацетата аммония до конечной концентрации 2–2,5 М и хорошо смешиваем\n(см. примечание 28).\n28. Добавляем 4 объема от объема РНК абсолютного\nспирта и хорошо смешиваем. Инкубируем полученный\nобразец при температуре -20 °C с 4 до 12 часов.\n29. Центрифугируем при 16,000 об/мин в течение\n30 мин. при 4 °C для осаждения РНК.\n30. Промываем полученные гранулы дважды 80 %\nспиртом.\n31. Ресуспендируем гранулы РНК в объеме воды, свободной от РНКаз, следуя стандартному протоколу производителя.\nПримечания\n1. Комплект MirVana PARIS рассчитан на 40 реакций\nпри использовании протокола, предоставленного производителем, и предлагаемых тканей (см. Руководство\nпользователя Ambion mirVana PARIS Kit). С модифицированным протоколом, описанным здесь, этот комплект\nпредставлен приблизительно для 20 мл биожидкости.\n2. 2/3 промывочного раствора используется для второй и третьей промывки колонки на основе диоксида\nкремния, содержащей иммобилизованную РНК.\n3. Фильтр мини-колонки и ее сборная пробирка будут\nповторно использоваться на всех этапах в этом модифицированном протоколе, за исключением последнего,\nв котором завершена изоляция и очистка РНК.\n4. Буфер для лизиса клеток включен в список реагентов, однако он не будет использоваться для текущего\nметода, который был разработан для образцов биологических жидкостей.\n5. Кислота-фенол-хлороформная основа является едкой, поэтому при обращении и утилизации необходимо\nсоблюдать осторожность. Необходимы средства индивидуальной защиты и использование вытяжного шкафа.\n6. В текущем протоколе для элюирования тотальной РНК и ее фракций используют воду, свободную\nот РНКаз.\n7. Поскольку соотношение этанола и водного буфера\nважно независимо от того, растворена ли РНК, или выпала в осадок в растворе, крайне важно использовать\nабсолютный этанол ACS-класса (ACS — Американское\nхимическое общество) или лучше при приготовлении\nспиртовых буферных растворов. Каждый раз, когда\nобезвоженный этанол подвергается воздействию окружающей среды, в нем растворяется вода из окружающей среды, что впоследствии уменьшает содержание\nэтанола в растворе ниже по потоку.\n8. Из-за соображений безопасности, за исключением последнего шага, весь протокол должен выполняться в вытяжном шкафу с отрицательным воздушным потоком,\nпредназначенным для летучих химических веществ.\n9. Важным аспектом молекулярной функции всех\nбуферов и растворов является их pH. Поскольку температура оказывает существенное влияние на рН, ее\nследует контролировать. Все описанные здесь шаги\nвыполняются при комнатной температуре, если\nне указано иное. Однако центрифугирование может\nувеличить температуру центрифугируемого образца.\nТаким образом, центрифуги, используемые на этапах\nцентрифугирования без мини-колонок, должны быть\nустановлены на стандартную температуру окружающей среды 25 °C. Для кратковременных этапов центрифугирования, например для пропускания жидкости\nчерез мини-колонки, центрифуга с контролируемой\nтемпературой не требуется.\n10. Не важно, при какой скорости используется стандартный лабораторный орбитально-качающийся шейкер, если он позволяет тщательно перемешивать замороженные образцы в денатурирующем растворе.\n11. Мы обнаружили, что сборные пробирки, поставляемые с комплектом mirVana PARIS Kit, не всегда плотно закрывались. Кроме того, использование пробирок\nс неплотно закрывающимися крышками приводит к испарению и уменьшает остаточный материал РНК, находящийся в сборной пробирке. Поэтому, как только РНК элюируется из мини-колонки, ее следует перенести в плотно\nзакрывающуюся стерильную пробирку без РНКаз.\n12. Очистим рабочий стол и все оборудование, которое\nбудет использоваться для экстракции РНК, с помощью\nрастворов-дезактиваторов РНКаз или салфеток в соответствии с рекомендациями производителя для этих\nпродуктов. Следует принять общие меры предосторожности, чтобы свести к минимуму возможное воздействие РНКаз на РНК.\n13. Хотя малые РНК относительно стабильны в биологических жидкостях [12], обрабатывая образцы одинаковым способом, каждый раз можно будет гарантировать минимизацию смещения сбора и сохранить общий\nпрофиль тотальной РНК. В замороженных образцах\nРНКазы неактивны из-за низкой температуры, которая\nне позволяет воде находиться в жидкой форме, необходимой для того, чтобы эти ферменты меняли структуру\nРНК. Образцы оттаивают в присутствии 2 денатурирующего раствора, чтобы гарантировать, что РНКазы\nбудут денатурированы, поэтому они необратимо инактивируются [11].\n14. Набор MirVana PARIS поставляется при комнатной\nтемпературе, а компоненты хранятся либо при комнатной температуре, либо при температуре 4 °C в соответствии с правилами производителя. Для использования\nв обычном режиме или в текущем модифицированном протоколе перед использованием компонентов\nMirVana Paris Kit необходимо довести их до комнатной\nтемпературы.\n15. В промывочном растворе 2/3 может образовываться осадок белого цвета, но это не имеет никакого значения, и его следует оставить в бутылке при использовании этого раствора.\n16. 2 денатурирующий раствор образует осадок при рекомендуемой температуре хранения 4 °C. После прогрева до комнатной температуры нужно осмотреть,\nостался ли осадок в растворе. Если присутствует твердый белый осадок, нужно плотно закрыть бутылку\nи при 37 °C перемешивать его до полного растворения.\n17. Для обеспечения герметичности пробирок и исключения испарения раствора под воздействием повышенной температуры и давления при центрифугировании можно использовать алюминиевую фольгу.\n18. Оцениваем объем биологического образца. Если\nпробирка для образцов заполнена больше, чем наполовину, нужно предотвратить добавление равного объема 2 денатурирующего раствора и добавить только\n1/10 объема 2 денатурирующего раствора, энергично\nперемешивая до тех пор, пока замороженный образец\nне будет слегка разморожен. Перенесите этот образец\nи остаточный раствор в большую пробирку, где есть\nоставшийся 2 денатурирующий раствор.\n19. Небольшой объем водного буфера покрывает органическую кислотно-фенол-хлороформную основу. При\nиспользовании этого реагента убедитесь, что присутствуют два разных слоя. Следует избегать взбалтывания этого раствора, чтобы слои не смешивались. Если\nраствор выглядит мутным или присутствуют пузырьки\nвоздуха, следует подождать осаждения до тех пор, пока\nдва слоя не будут заметно разделены. При использовании этого раствора обязательно удалите кислотно-фенол-хлороформную основу из-под водного буферного\nслоя. Когда объем раствора уменьшится, обязательно\nпроконтролируйте, что вы удалили эту основу, а не вышележащий водный буфер.\n20. Стадия фазового разделения фенол-хлороформа\nвключает центрифугирование относительно большого\nобъема. Поэтому рекомендуется, чтобы ротор для центрифуги был с регулируемой температурой (см. примечание 9) и был совместим с центрифужными пробирками. Пробирки должны быть способны удерживать\nраствор в 5 раз больше своего объема.\n21. В зависимости от образцов (биологических жидкостей) белая интерфаза может и не наблюдаться, особенно для второй экстракции. При тщательном осмотре\nфазы должны быть видны и не должны смешиваться\nпри пипетировании верхнего водного объема.\n22. Мини-колонки из набора MirVana PARIS были разработаны для протокола изготовителя. С помощью\nмодифицированного метода большие объемы, чем первоначально предполагалось, проходят через весь столбец мини-колонок. Поскольку РНК будет связываться\nс мембраной (диоксид кремния) столбца мини-колонок, лучше всего тщательно поддерживать целостность\nстолбца. Поэтому максимальная скорость центрифугирования, рекомендуемая для пропускания водного раствора экстракции/этанола, составляет 800 g.\n23. Готовый промывочный раствор 1содержит 21 мл\n100 % этанола.\n24. Готовый промывочный раствор 2/3 содержит 40 мл\n100 % этанола.\n25. Чтобы предотвратить проникновение высушенного остаточного материала в свежий резервуар пробирки, очистите внешнюю поверхность колонки фильтра,\nиспользуя протирание раствором 70 % этанола, но избегайте смачивания фильтра.\n26. Разогреваем воду, свободную от РНКаз, на тепловом блоке до 95 °C и используем эту воду для элюирования РНК из мембраны мини-колонок. Чтобы учесть,\nчто при этой температуре происходит испарение, нужно удвоить объем воды, которая будет использоваться,\nа также она должна быть предварительно нагрета.\n27. Если РНК будет использоваться для любых других\nметодов секвенирования, помимо малых РНК, может\nпотребоваться обработка ДНК-образца.\n28. Осаждение РНК этанолом должно всегда происходить с добавлением солевых растворов, и они должны\nбыть тщательно перемешаны перед добавлением спирта.\nОбсуждение\nМы протестировали различные коммерчески доступные\nнаборы для извлечения РНК и обнаружили, что некоторые из них были более эффективными при выделении\nмалых РНК из биологических жидкостей, чем другие.\nТакже были проверены модификации протоколов, сделанных другими исследователями, для более высокого\nвыхода РНК [13]. Лучшие условия для получения высокого выхода малых РНК из биожидкостей описаны в этой\nметодике, так как мы считаем, что она имеет ценность\nдля исследователей, которые планируют работать с NGS.\nНастоящее исследование специально было разработано\nи протестировано для изоляции малых РНК из цереброспинальной жидкости человека для последующей работы с NGN на платформе Illumina (Illumina, San Fransico,\nCA, USA). Также метод может быть дополнительно применен к образцам слюны и мочи человека [14].\nОписанный здесь метод был протестирован и показал,\nчто он улучшает восстановление или выделение малых\nРНК из цереброспинальной жидкости. Однако этот метод не ограничивается этим типом образцов и может\nразумно применяться к другим типам биологических\nжидкостей [15]. Поскольку каждый тип выборки может\nсоздавать определенные проблемы, мы настоятельно\nрекомендуем тестировать различные методы для каждого конкретного типа образца, т. е. типа ткани.\nДоказана роль секвенирования следующего поколения\nв дифференциальной диагностике сложных новообразований. Acosta и др. оценили потенциальное применение NGS в диагностике этих редких новообразований\n[16]. В исследование были включены четыре новообразования. Два были диагностированы как смешанная\nаденонейроэндокринная карцинома желчного пузыря\nи метастатический папиллярный рак щитовидной железы с плоскоклеточной дедифференцировкой, а два были интерпретированы как аденокарцинома пищевода в аденокарциному легких и мелкоклеточная карцинома легкого на/в менингеальную меланому. Это исследование\nиллюстрирует роль NGS в дифференциальной диагностике редких новообразований как дополнения к световой микроскопии и иммуногистохимии.\nЗаключение\nВ этой статье мы описали методику для экстракции малых РНК из биологических жидкостей человека для последующего секвенирования нового поколения, которую сочли полезной при исследованиях данных типов\nРНК в качестве потенциальных биомаркеров. Как указано выше, подготовка образцов, выбор реагентов —\nнемаловажные факторы, учитывая текущую нехватку\nзнаний об их влиянии на последующее секвенирование\nнового поколения малых РНК. Кроме того, тщательно\nпостроенный план эксперимента, связанный с выбором типов образцов и техники экстракции малых РНК,\nважен для получения хороших результатов в работе\nс секвенированием нового поколения."],"dc.fullHTML":["

Введение

\n

Исследователи, которые хотят выполнить секвениро- вание нового поколения (NGS), должны решить ряд проблем, связанных со способами и методами подго­товки образцов. Способы экстракции РНК из тканей или клеток, создание базы данных для секвенирования и типов секвенирования, которые будут выполняться, становятся решающими факторами в дизайне экспери­ментальной работы [1]. В частности, для секвенирова­ния различных классов молекул РНК, по крайней мере частично, определяются и упорядочиваются по их раз­меру. Микро-РНК (miRNAs, 18-22 нуклеотида), малые интерферирующие РНК (siRNAs, 20-25 нуклеотидов) и PIWI-взаимодействующие РНК (piRNA, приблизи­тельно 30 нуклеотидов) являются разновидностями малых некодирующих РНК, участвующих в последова­тельном ингибировании экспрессии генов на посттран- скрипционном уровне [2]. Хотя в настоящее время ма­лые РНК известны как наименьший функциональный класс, но их биологическая значимость для регулирова­ния экспрессии генов все еще изучается на протяжении 20 лет с момента их открытия [3]. С недавних пор NGS используется для получения небольших дифференци­альных профилей экспрессии РНК для изучения этапов развития тканей, типов тканей и патологических со­стояний, таких как онкология, сердечно-сосудистые за­болевания и психические расстройства с потенциалом для поиска новых биомаркеров [4-7].

\n

До недавнего времени считалось, что способы экстрак­ции РНК из тканей позволяли извлекать все виды РНК: примерно от длинных до малых РНК, которые включают кодирующие РНК (мРНК), длинные некодирующие РНК (lncRNA), транспортные РНК (тРНК), малые ядрышковые РНК (snoRNA), PIWI -взаимодействующие РНК (piRNA) и микро-РНК (miRNA) [2]. Экстракция всех видов РНК подразумевается в описании многих коммерчески до­ступных наборов и методов, описывающих изоляцию тотальной РНК. Фактически они используются для мето­дов, которые вообще не извлекают малые РНК, но имеют­ся такие наборы, которые основываются на использова­нии мини-колонок с диоксидом кремния (SiO₂), которые и проводят экстракцию малых РНК. Кроме того, в ряде наборов использовались соотношения солей и спирта, не достаточные для изоляции малых РНК из образцов. В настоящее время существует множество коммерчески доступных наборов для экстракции малых РНК. Хотя ме­тодики имеют некоторые отличия, большинство из них используют тиоцианат гуанидиния для денатурирования РНКаз и белков с последующей экстракцией РНК с фе­нол-хлороформом [8, 9]. Систематическое тестирование показало, что производительность наборов для изоляции РНК варьируется в зависимости от типов образцов [10]. Ряд наборов лучше подходят к конкретным видам об­разцов, чем к другим. Например, соединительная ткань, такая как мышечная, должна обрабатываться иначе, чем богатая липидами нервная ткань. Лучшим вариантом мо­жет быть выбор комплекта, специально разработанного для решения проблем с экстракцией РНК для конкретно­го типа ткани.

\n

Из трех лучших наборов для изоляции тотальной РНК и ее фракций набор MaxRecovery BiooPure RNA (Bio Scientific, Austin, TX, USA) не был выбран, так как про­являлась некоторая потеря РНК в отдельных образцах. Стандартный набор MirVana Kit (Life Technologies), ко­торый в своей методике не предлагает исследователям возможность выделения белка из исходного лизата, хо­рошо работает, но не был выбран, потому что первый буфер добавляется в соотношении 10:1 к объему образ­ца. Таким образом, для каждого образца объемом 1 мл потребуется более 50 отдельных этапов центрифугиро­вания, что делает этот метод логически необоснован­ным для выделения РНК из биологических жидкостей. Набор MirVana PARIS (выделения белка и РНК) Kit (Life Technologies) наилучшим образом обеспечивал выход РНК вследствие легкости применения при системати­ческом сравнении с другими коммерчески доступными наборами и методами [10].

\n

Набор MirVana PARIS включает использование запатен­тованного лизирующего буфера с β-меркаптоэтанолом, который служит для денатурирования белков био­логических жидкостей, экстракции РНК фенол-хло­роформом из образца, с высоким содержанием белка, липидов и ДНК, с последующей очисткой на спирто­вой/колоночной основе перед элюированием РНК. В этой работе мы описываем метод экстракции малых РНК длиной менее 200 нуклеотидов из биологических жидкостей человека и его оптимизацию по экстракции малых РНК длиной менее 200 нуклеотидов из биологи­ческих жидкостей человека [10]. Основные изменения в дополнение к стандартному протоколу, предоставлен­ному изготовителем, включают повторное извлечение РНК вместо удаления остаточного фенол-хлороформа путем добавления воды, свободной от РНКаз, ремик- сации и отделения другого объема раствора. Хотя уро­вень для лучшей экстракции малых РНК с использова­нием модификаций, предложенных в этой работе, будет варьироваться в зависимости от конкретного набора, к которому применяется эта методика, было показано, что он обладает кроссплатформенной применимостью [10]. Наборы, использующие кислота-фенол-хлоро- формную основу, могут быть полезны с некоторыми дополнениями для набора mirVana PARIS. Выход РНК из всех образцов, которые были протестированы, полу­чался из второй водной экстракции из остаточного кис- лота-фенол-хлороформного материала [10]. Поскольку современные методы NGS для малых РНК выполня­ются отдельно от РНК с более длинной цепочкой ну­клеотидов, тот факт, что лучшие наборы для изоляции малых или больших молекул РНК различны, не пред­ставляет проблем на момент этой работы.

\n

Материалы

\n

\n
1. MirVana PARIS Kit отAmbion (см. примечание1):
\n

\n

\n
• раствор для промывки 1;
\n
• раствор для промывки 2/3 (см. примечание 2);
\n
• сборные пробирки и фильтровальные картриджи (см. примечание 3);
\n
• буфер для лизиса клеток (см. примечание 4);
\n
• 2 денатурирующий раствор, тиоцианат гуанидиния- фенол-хлороформная основа (см. примечание 5);
\n
• раствор для элюирования (см. примечание 6).
\n

\n

\n
1. Абсолютный этиловый спирт (95,6-100 %) ACS- класса или лучше (см. примечание 7).
\n
2. β-меркаптоэтанол.
\n
3. 7 M ацетат аммония.
\n
4. Криопробирки 2 мл (для образцов).
\n
5. Бенчтоп-центрифуга (скорость не менее 800 об/мин).
\n
6. Бокс биологической безопасности, класс II.
\n
7. Вытяжной шкаф с отрицательным воздушным пото­ком (см. примечание 8).
\n
8. Центрифуга, способная поддерживать комнатную температуру и центрифугировать по меньшей мере 10 000 об/мин, используя ротор, способный удерживать конические пробирки 15 мл (см. примечание 9).
\n
9. Лабораторный нагревательный блок, установлен­ный на 95-100 °C.
\n
10. Орбитально-качающийся шейкер (см. примеча­ние 10).
\n
11. Пробирки 1,5 мл, не содержащие РНКаз (см. при­мечание 11).
\n
12. Салфетки или растворы в виде спрея для обеззара­живания РНКаз (см. примечание 12).
\n

\n

Методы

\n

Приготовление образцов

\n

После взятия биологической жидкости (цереброспи­нальная жидкость) помещаем образцы в криопробирки 2 мл, их необходимо быстро заморозить в жидком азоте либо в суспензии абсолютного этанола с сухим льдом, чтобы сохранить профиль РНК (см. примечание 13). Использование шкафа биобезопасности требуется при обращении с биологическими образцами для защи­ты исследователей от воздействия патогенов человека.

\n

Подготовка набора MirVana PARIS Kit

\n

\n
1. Инкубируем компоненты mirVanaPARISKit при ком­натной температуре (см. примечание 14).
\n
2. Добавляем 21 мл 100 % этанола в раствор для про­мывки РНК (см. примечание 7).
\n
3. Добавляем 40 мл 100 % этанола в раствор для про­мывки 2/3 (см. примечание 7 и 15).
\n
4. Добавляем 375 мкл β-меркаптоэтанол в 2 денатури­рующий раствор см. примечание 16).
\n
5. Добавляем аликвоту 1 мл воды, свободной от РНКаз (см. примечание 6), в микроцентрифужные пробирки 1,5 мл и помещаем их на нагревательный блок, установ­ленный на 95 °C. Эта предварительно нагретая вода бу­дет использоваться для элюирования РНК из мембран мини-колонок на конечной стадии (см. примечание 17).
\n

\n

Измененная методика протокола MirVana PARIS Kit

\n

\n
1. Добавляем равный объем 2 денатурирующего рас­твора к замороженному образцу (цереброспинальная жидкость) (см. примечание 18).
\n
2. Помещаем образец на орбитально-качающийся шей- кер при комнатной температуре до полного оттаивания и смешивания (см. примечание 10).
\n
3. Инкубируем в течение 10 мин при комнатной тем­пературе.
\n
4. Добавляем равные объемы тиоцианат гуанидиния, фенола и хлороформа (кислотно-фенол-хлороформная основа) (см. примечание 19).
\n
5. Смешиваем на вортексе в течение 30 сек.
\n
6. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре (см. примечание 20).
\n
7. Осторожно снимаем пробирки с центрифуги, и нуж­но убедиться, что имеются верхний (водный) слой и нижний (органический) слой.
\n
8. Переносим приблизительно 90 % верхней водной фазы от этой первой экстракции в чистую пробирку 2 мл и определяем объем. Позаботьтесь о том, чтобы мениск оставшегося объема водной фазы не касался интерфазы (см. примечание 21). Откладываем в сторону.
\n
9. В оставшийся органический остаток добавляем объем воды, свободной от РНК, эквивалентный водному объ­ему, который был просто перенесен в новую пробирку.
\n
10. Смешиваем на вортексе в течение 30 сек.
\n
11. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре.
\n
12. Переносим приблизительно 90 % верхней водной фазы этой второй экстракции в ту же самую пробир­ку, которая содержит водный объем от первой водной фазы (белки и РНК) (см. примечание 21). Остальная часть с органической фазой теперь может быть выбро­шена (см. примечание 5).
\n
13. Добавляем 1,5 объема 100 % этанола в общий объ­ем полученной жидкости, рассчитанный от удаленного из первого и второго органических экстрактов (см. при­мечание 7).
\n
14. Инвертируем 10 раз для смешивания и даем раство­ру инкубироваться при комнатной температуре в тече­ние 10 мин.
\n
15. Добавляем 700 мкл полученной жидкости в мини­колонки и центрифугируем при 800 об/мин при ком­натной температуре (см. примечание 22), сбрасываем полученную жидкость из сборной пробирки и повто­ряем шаги, пока не закончится исследуемый образец (см. примечание 3).
\n
16. Добавляем 700 мкл подготовленного промывоч­ного раствора 1 в мини-колонки и центрифугируем при 800 об/мин в течение 30 сек. для пропускания рас­твора через мембрану мини-колонок (см. примеча­ния 23 и 22). Сбрасываем полученную жидкость из сбор­ной пробирки (см. примечание 3).
\n
17. Добавляем 500 мкл подготовленного промывочно­го раствора 2/3 в мини-колонки (см. примечание 24) и центрифугируем при 800 об/мин в течение 30 сек. (см. примечание 22). Сбрасываем полученную жид­кость из сборной пробирки.
\n
18. Повторяем шаг
\n
19. Без применения каких-либо других растворов ми­ни-колонки после центрифугирования и их пустые сборные пробирки в течение 30 сек. высушиваются от остаточного этанола.
\n
20. Перемешиваем мини-колонки в новые сборные пробирки (см. примечание 25).
\n
21. Добавляем 100 мкл 95 °С (см. примечание 26) воды, сво­бодной от РНКаз, (см. примечание 6) в мини-колонки и ин­кубируем при комнатной температуре в течение 1 минуты.
\n
22. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 1 мин для элюирования РНК через мембрану мини-колонок (см. примечание 27).
\n
23. Повторяем шаги 21 и 22.
\n
24. Фильтрующий компонент мини-колонок можно выбросить, поскольку РНК элюируется из фильтра и находится в сборной пробирке.
\n
25. Центрифугируем данные образцы с РНК на макси­мальной скорости в течение 1 мин до выпадения осадка.
\n
26. Избегая осадка, переносим РНК из данной пробирки в новую пробирку. Приступаем к осаждению этанолом для подготовки малых РНК к NGS (см. примечание 27).
\n
27. Добавляем 0,5 объема 7 М ацетата аммония до ко­нечной концентрации 2-2,5 М и хорошо смешиваем (см. примечание 28).
\n
28. Добавляем 4 объема от объема РНК абсолютного спирта и хорошо смешиваем. Инкубируем полученный образец при температуре -20 °С с 4 до 12 часов.
\n
29. Центрифугируем при 16,000 об/мин в течение 30 мин. при 4 °C для осаждения РНК.
\n
30. Промываем полученные гранулы дважды 80 % спиртом.
\n
31. Ресуспендируем гранулы РНК в объеме воды, сво­бодной от РНКаз, следуя стандартному протоколу про­изводителя.
\n

\n

Примечания

\n

\n
1. Комплект MirVana PARIS рассчитан на 40 реакций при использовании протокола, предоставленного про­изводителем, и предлагаемых тканей (см. Руководство пользователя Ambion mirVana PARIS Kit). С модифици­рованным протоколом, описанным здесь, этот комплект представлен приблизительно для 20 мл биожидкости.
\n
2. 2/3 промывочного раствора используется для вто­рой и третьей промывки колонки на основе диоксида кремния, содержащей иммобилизованную РНК.
\n
3. Фильтр мини-колонки и ее сборная пробирка будут повторно использоваться на всех этапах в этом моди­фицированном протоколе, за исключением последнего, в котором завершена изоляция и очистка РНК.
\n
4. Буфер для лизиса клеток включен в список реаген­тов, однако он не будет использоваться для текущего метода, который был разработан для образцов биоло­гических жидкостей.
\n
5. Кислота-фенол-хлороформная основа является ед­кой, поэтому при обращении и утилизации необходимо соблюдать осторожность. Необходимы средства инди­видуальной защиты и использование вытяжного шкафа.
\n
6. В текущем протоколе для элюирования тоталь­ной РНК и ее фракций используют воду, свободную от РНКаз.
\n
7. Поскольку соотношение этанола и водного буфера важно независимо от того, растворена ли РНК, или вы­пала в осадок в растворе, крайне важно использовать абсолютный этанол ACS-класса (ACS — Американское химическое общество) или лучше при приготовлении спиртовых буферных растворов. Каждый раз, когда обезвоженный этанол подвергается воздействию окру­жающей среды, в нем растворяется вода из окружаю­щей среды, что впоследствии уменьшает содержание этанола в растворе ниже по потоку.
\n
8. Из-за соображений безопасности, за исключением по­следнего шага, весь протокол должен выполняться в вы­тяжном шкафу с отрицательным воздушным потоком, предназначенным для летучих химических веществ.
\n
9. Важным аспектом молекулярной функции всех буферов и растворов является их pH. Поскольку тем­пература оказывает существенное влияние на рН, ее следует контролировать. Все описанные здесь шаги выполняются при комнатной температуре, если не указано иное. Однако центрифугирование может увеличить температуру центрифугируемого образца. Таким образом, центрифуги, используемые на этапах центрифугирования без мини-колонок, должны быть установлены на стандартную температуру окружаю­щей среды 25 °С. Для кратковременных этапов центри­фугирования, например для пропускания жидкости через мини-колонки, центрифуга с контролируемой температурой не требуется.
\n
10. Не важно, при какой скорости используется стан­дартный лабораторный орбитально-качающийся шей- кер, если он позволяет тщательно перемешивать замо­роженные образцы в денатурирующем растворе.
\n
11. Мы обнаружили, что сборные пробирки, поставля­емые с комплектом mirVana PARIS Kit, не всегда плот­но закрывались. Кроме того, использование пробирок с неплотно закрывающимися крышками приводит к ис­парению и уменьшает остаточный материал РНК, находя­щийся в сборной пробирке. Поэтому, как только РНК элю­ируется из мини-колонки, ее следует перенести в плотно закрывающуюся стерильную пробирку без РНКаз.
\n
12. Очистим рабочий стол и все оборудование, которое будет использоваться для экстракции РНК, с помощью растворов-дезактиваторов РНКаз или салфеток в со­ответствии с рекомендациями производителя для этих продуктов. Следует принять общие меры предосторож­ности, чтобы свести к минимуму возможное воздей­ствие РНКаз на РНК.
\n
13. Хотя малые РНК относительно стабильны в биоло­гических жидкостях [12], обрабатывая образцы одина­ковым способом, каждый раз можно будет гарантиро­вать минимизацию смещения сбора и сохранить общий профиль тотальной РНК. В замороженных образцах РНКазы неактивны из-за низкой температуры, которая не позволяет воде находиться в жидкой форме, необхо­димой для того, чтобы эти ферменты меняли структуру РНК. Образцы оттаивают в присутствии 2 денатури­рующего раствора, чтобы гарантировать, что РНКазы будут денатурированы, поэтому они необратимо инак­тивируются [11].
\n
14. Набор MirVana PARIS поставляется при комнатной температуре, а компоненты хранятся либо при комнат­ной температуре, либо при температуре 4 °C в соответ­ствии с правилами производителя. Для использования в обычном режиме или в текущем модифицирован­ном протоколе перед использованием компонентов MirVana Paris Kit необходимо довести их до комнатной температуры.
\n
15. В промывочном растворе 2/3 может образовывать­ся осадок белого цвета, но это не имеет никакого значе­ния, и его следует оставить в бутылке при использова­нии этого раствора.
\n
16. 2 денатурирующий раствор образует осадок при ре­комендуемой температуре хранения 4 °C. После про­грева до комнатной температуры нужно осмотреть, остался ли осадок в растворе. Если присутствует твер­дый белый осадок, нужно плотно закрыть бутылку и при 37 °C перемешивать его до полного растворения.
\n
17. Для обеспечения герметичности пробирок и ис­ключения испарения раствора под воздействием повы­шенной температуры и давления при центрифугирова­нии можно использовать алюминиевую фольгу.
\n
18. Оцениваем объем биологического образца. Если пробирка для образцов заполнена больше, чем напо­ловину, нужно предотвратить добавление равного объ­ема 2 денатурирующего раствора и добавить только 1/10 объема 2 денатурирующего раствора, энергично перемешивая до тех пор, пока замороженный образец не будет слегка разморожен. Перенесите этот образец и остаточный раствор в большую пробирку, где есть оставшийся 2 денатурирующий раствор.
\n
19. Небольшой объем водного буфера покрывает орга­ническую кислотно-фенол-хлороформную основу. При использовании этого реагента убедитесь, что присут­ствуют два разных слоя. Следует избегать взбалтыва­ния этого раствора, чтобы слои не смешивались. Если раствор выглядит мутным или присутствуют пузырьки воздуха, следует подождать осаждения до тех пор, пока два слоя не будут заметно разделены. При использова­нии этого раствора обязательно удалите кислотно-фе- нол-хлороформную основу из-под водного буферного слоя. Когда объем раствора уменьшится, обязательно проконтролируйте, что вы удалили эту основу, а не вы­шележащий водный буфер.
\n
20. Стадия фазового разделения фенол-хлороформа включает центрифугирование относительно большого объема. Поэтому рекомендуется, чтобы ротор для цен­трифуги был с регулируемой температурой (см. приме­чание 9) и был совместим с центрифужными пробир­ками. Пробирки должны быть способны удерживать раствор в 5 раз больше своего объема.
\n
21. В зависимости от образцов (биологических жидко­стей) белая интерфаза может и не наблюдаться, особен­но для второй экстракции. При тщательном осмотре фазы должны быть видны и не должны смешиваться при пипетировании верхнего водного объема.
\n
22. Мини-колонки из набора MirVana PARIS были раз­работаны для протокола изготовителя. С помощью модифицированного метода большие объемы, чем пер­воначально предполагалось, проходят через весь стол­бец мини-колонок. Поскольку РНК будет связываться с мембраной (диоксид кремния) столбца мини-коло­нок, лучше всего тщательно поддерживать целостность столбца. Поэтому максимальная скорость центрифуги­рования, рекомендуемая для пропускания водного рас­твора экстракции/этанола, составляет 800 g.
\n
23. Готовый промывочный раствор 1содержит 21 мл 100 % этанола.
\n
24. Готовый промывочный раствор 2/3 содержит 40 мл 100 % этанола.
\n
25. Чтобы предотвратить проникновение высушенно­го остаточного материала в свежий резервуар пробир­ки, очистите внешнюю поверхность колонки фильтра, используя протирание раствором 70 % этанола, но из­бегайте смачивания фильтра.
\n
26. Разогреваем воду, свободную от РНКаз, на тепло­вом блоке до 95 °C и используем эту воду для элюиро­вания РНК из мембраны мини-колонок. Чтобы учесть, что при этой температуре происходит испарение, нуж­но удвоить объем воды, которая будет использоваться, а также она должна быть предварительно нагрета.
\n
27. Если РНК будет использоваться для любых других методов секвенирования, помимо малых РНК, может потребоваться обработка ДНК-образца.
\n
28. Осаждение РНК этанолом должно всегда происхо­дить с добавлением солевых растворов, и они должны быть тщательно перемешаны перед добавлением спирта.
\n

\n

Обсуждение

\n

Мы протестировали различные коммерчески доступные наборы для извлечения РНК и обнаружили, что некото­рые из них были более эффективными при выделении малых РНК из биологических жидкостей, чем другие. Также были проверены модификации протоколов, сде­ланных другими исследователями, для более высокого выхода РНК [13]. Лучшие условия для получения высо­кого выхода малых РНК из биожидкостей описаны в этой методике, так как мы считаем, что она имеет ценность для исследователей, которые планируют работать с NGS. Настоящее исследование специально было разработано и протестировано для изоляции малых РНК из церебро­спинальной жидкости человека для последующей рабо­ты с NGN на платформе Illumina (Illumina, San Fransico, CA, USA). Также метод может быть дополнительно при­менен к образцам слюны и мочи человека [14]. Описанный здесь метод был протестирован и показал, что он улучшает восстановление или выделение малых РНК из цереброспинальной жидкости. Однако этот ме­тод не ограничивается этим типом образцов и может разумно применяться к другим типам биологических жидкостей [15]. Поскольку каждый тип выборки может создавать определенные проблемы, мы настоятельно рекомендуем тестировать различные методы для каж­дого конкретного типа образца, т. е. типа ткани. Доказана роль секвенирования следующего поколения в дифференциальной диагностике сложных новообра­зований. Acosta и др. оценили потенциальное примене­ние NGS в диагностике этих редких новообразований [16]. В исследование были включены четыре новооб­разования. Два были диагностированы как смешанная аденонейроэндокринная карцинома желчного пузыря и метастатический папиллярный рак щитовидной желе­зы с плоскоклеточной дедифференцировкой, а два были интерпретированы как аденокарцинома пищевода в аде­нокарциному легких и мелкоклеточная карцинома лег­кого на/в менингеальную меланому. Это исследование иллюстрирует роль NGS в дифференциальной диагно­стике редких новообразований как дополнения к свето­вой микроскопии и иммуногистохимии.

\n

Заключение

\n

В этой статье мы описали методику для экстракции ма­лых РНК из биологических жидкостей человека для по­следующего секвенирования нового поколения, кото­рую сочли полезной при исследованиях данных типов РНК в качестве потенциальных биомаркеров. Как ука­зано выше, подготовка образцов, выбор реагентов — немаловажные факторы, учитывая текущую нехватку знаний об их влиянии на последующее секвенирование нового поколения малых РНК. Кроме того, тщательно построенный план эксперимента, связанный с выбо­ром типов образцов и техники экстракции малых РНК, важен для получения хороших результатов в работе с секвенированием нового поколения.

"],"dc.fullHTML.ru":["

Введение

\n

Исследователи, которые хотят выполнить секвениро- вание нового поколения (NGS), должны решить ряд проблем, связанных со способами и методами подго­товки образцов. Способы экстракции РНК из тканей или клеток, создание базы данных для секвенирования и типов секвенирования, которые будут выполняться, становятся решающими факторами в дизайне экспери­ментальной работы [1]. В частности, для секвенирова­ния различных классов молекул РНК, по крайней мере частично, определяются и упорядочиваются по их раз­меру. Микро-РНК (miRNAs, 18-22 нуклеотида), малые интерферирующие РНК (siRNAs, 20-25 нуклеотидов) и PIWI-взаимодействующие РНК (piRNA, приблизи­тельно 30 нуклеотидов) являются разновидностями малых некодирующих РНК, участвующих в последова­тельном ингибировании экспрессии генов на посттран- скрипционном уровне [2]. Хотя в настоящее время ма­лые РНК известны как наименьший функциональный класс, но их биологическая значимость для регулирова­ния экспрессии генов все еще изучается на протяжении 20 лет с момента их открытия [3]. С недавних пор NGS используется для получения небольших дифференци­альных профилей экспрессии РНК для изучения этапов развития тканей, типов тканей и патологических со­стояний, таких как онкология, сердечно-сосудистые за­болевания и психические расстройства с потенциалом для поиска новых биомаркеров [4-7].

\n

До недавнего времени считалось, что способы экстрак­ции РНК из тканей позволяли извлекать все виды РНК: примерно от длинных до малых РНК, которые включают кодирующие РНК (мРНК), длинные некодирующие РНК (lncRNA), транспортные РНК (тРНК), малые ядрышковые РНК (snoRNA), PIWI -взаимодействующие РНК (piRNA) и микро-РНК (miRNA) [2]. Экстракция всех видов РНК подразумевается в описании многих коммерчески до­ступных наборов и методов, описывающих изоляцию тотальной РНК. Фактически они используются для мето­дов, которые вообще не извлекают малые РНК, но имеют­ся такие наборы, которые основываются на использова­нии мини-колонок с диоксидом кремния (SiO₂), которые и проводят экстракцию малых РНК. Кроме того, в ряде наборов использовались соотношения солей и спирта, не достаточные для изоляции малых РНК из образцов. В настоящее время существует множество коммерчески доступных наборов для экстракции малых РНК. Хотя ме­тодики имеют некоторые отличия, большинство из них используют тиоцианат гуанидиния для денатурирования РНКаз и белков с последующей экстракцией РНК с фе­нол-хлороформом [8, 9]. Систематическое тестирование показало, что производительность наборов для изоляции РНК варьируется в зависимости от типов образцов [10]. Ряд наборов лучше подходят к конкретным видам об­разцов, чем к другим. Например, соединительная ткань, такая как мышечная, должна обрабатываться иначе, чем богатая липидами нервная ткань. Лучшим вариантом мо­жет быть выбор комплекта, специально разработанного для решения проблем с экстракцией РНК для конкретно­го типа ткани.

\n

Из трех лучших наборов для изоляции тотальной РНК и ее фракций набор MaxRecovery BiooPure RNA (Bio Scientific, Austin, TX, USA) не был выбран, так как про­являлась некоторая потеря РНК в отдельных образцах. Стандартный набор MirVana Kit (Life Technologies), ко­торый в своей методике не предлагает исследователям возможность выделения белка из исходного лизата, хо­рошо работает, но не был выбран, потому что первый буфер добавляется в соотношении 10:1 к объему образ­ца. Таким образом, для каждого образца объемом 1 мл потребуется более 50 отдельных этапов центрифугиро­вания, что делает этот метод логически необоснован­ным для выделения РНК из биологических жидкостей. Набор MirVana PARIS (выделения белка и РНК) Kit (Life Technologies) наилучшим образом обеспечивал выход РНК вследствие легкости применения при системати­ческом сравнении с другими коммерчески доступными наборами и методами [10].

\n

Набор MirVana PARIS включает использование запатен­тованного лизирующего буфера с β-меркаптоэтанолом, который служит для денатурирования белков био­логических жидкостей, экстракции РНК фенол-хло­роформом из образца, с высоким содержанием белка, липидов и ДНК, с последующей очисткой на спирто­вой/колоночной основе перед элюированием РНК. В этой работе мы описываем метод экстракции малых РНК длиной менее 200 нуклеотидов из биологических жидкостей человека и его оптимизацию по экстракции малых РНК длиной менее 200 нуклеотидов из биологи­ческих жидкостей человека [10]. Основные изменения в дополнение к стандартному протоколу, предоставлен­ному изготовителем, включают повторное извлечение РНК вместо удаления остаточного фенол-хлороформа путем добавления воды, свободной от РНКаз, ремик- сации и отделения другого объема раствора. Хотя уро­вень для лучшей экстракции малых РНК с использова­нием модификаций, предложенных в этой работе, будет варьироваться в зависимости от конкретного набора, к которому применяется эта методика, было показано, что он обладает кроссплатформенной применимостью [10]. Наборы, использующие кислота-фенол-хлоро- формную основу, могут быть полезны с некоторыми дополнениями для набора mirVana PARIS. Выход РНК из всех образцов, которые были протестированы, полу­чался из второй водной экстракции из остаточного кис- лота-фенол-хлороформного материала [10]. Поскольку современные методы NGS для малых РНК выполня­ются отдельно от РНК с более длинной цепочкой ну­клеотидов, тот факт, что лучшие наборы для изоляции малых или больших молекул РНК различны, не пред­ставляет проблем на момент этой работы.

\n

Материалы

\n

\n
1. MirVana PARIS Kit отAmbion (см. примечание1):
\n

\n

\n
• раствор для промывки 1;
\n
• раствор для промывки 2/3 (см. примечание 2);
\n
• сборные пробирки и фильтровальные картриджи (см. примечание 3);
\n
• буфер для лизиса клеток (см. примечание 4);
\n
• 2 денатурирующий раствор, тиоцианат гуанидиния- фенол-хлороформная основа (см. примечание 5);
\n
• раствор для элюирования (см. примечание 6).
\n

\n

\n
1. Абсолютный этиловый спирт (95,6-100 %) ACS- класса или лучше (см. примечание 7).
\n
2. β-меркаптоэтанол.
\n
3. 7 M ацетат аммония.
\n
4. Криопробирки 2 мл (для образцов).
\n
5. Бенчтоп-центрифуга (скорость не менее 800 об/мин).
\n
6. Бокс биологической безопасности, класс II.
\n
7. Вытяжной шкаф с отрицательным воздушным пото­ком (см. примечание 8).
\n
8. Центрифуга, способная поддерживать комнатную температуру и центрифугировать по меньшей мере 10 000 об/мин, используя ротор, способный удерживать конические пробирки 15 мл (см. примечание 9).
\n
9. Лабораторный нагревательный блок, установлен­ный на 95-100 °C.
\n
10. Орбитально-качающийся шейкер (см. примеча­ние 10).
\n
11. Пробирки 1,5 мл, не содержащие РНКаз (см. при­мечание 11).
\n
12. Салфетки или растворы в виде спрея для обеззара­живания РНКаз (см. примечание 12).
\n

\n

Методы

\n

Приготовление образцов

\n

После взятия биологической жидкости (цереброспи­нальная жидкость) помещаем образцы в криопробирки 2 мл, их необходимо быстро заморозить в жидком азоте либо в суспензии абсолютного этанола с сухим льдом, чтобы сохранить профиль РНК (см. примечание 13). Использование шкафа биобезопасности требуется при обращении с биологическими образцами для защи­ты исследователей от воздействия патогенов человека.

\n

Подготовка набора MirVana PARIS Kit

\n

\n
1. Инкубируем компоненты mirVanaPARISKit при ком­натной температуре (см. примечание 14).
\n
2. Добавляем 21 мл 100 % этанола в раствор для про­мывки РНК (см. примечание 7).
\n
3. Добавляем 40 мл 100 % этанола в раствор для про­мывки 2/3 (см. примечание 7 и 15).
\n
4. Добавляем 375 мкл β-меркаптоэтанол в 2 денатури­рующий раствор см. примечание 16).
\n
5. Добавляем аликвоту 1 мл воды, свободной от РНКаз (см. примечание 6), в микроцентрифужные пробирки 1,5 мл и помещаем их на нагревательный блок, установ­ленный на 95 °C. Эта предварительно нагретая вода бу­дет использоваться для элюирования РНК из мембран мини-колонок на конечной стадии (см. примечание 17).
\n

\n

Измененная методика протокола MirVana PARIS Kit

\n

\n
1. Добавляем равный объем 2 денатурирующего рас­твора к замороженному образцу (цереброспинальная жидкость) (см. примечание 18).
\n
2. Помещаем образец на орбитально-качающийся шей- кер при комнатной температуре до полного оттаивания и смешивания (см. примечание 10).
\n
3. Инкубируем в течение 10 мин при комнатной тем­пературе.
\n
4. Добавляем равные объемы тиоцианат гуанидиния, фенола и хлороформа (кислотно-фенол-хлороформная основа) (см. примечание 19).
\n
5. Смешиваем на вортексе в течение 30 сек.
\n
6. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре (см. примечание 20).
\n
7. Осторожно снимаем пробирки с центрифуги, и нуж­но убедиться, что имеются верхний (водный) слой и нижний (органический) слой.
\n
8. Переносим приблизительно 90 % верхней водной фазы от этой первой экстракции в чистую пробирку 2 мл и определяем объем. Позаботьтесь о том, чтобы мениск оставшегося объема водной фазы не касался интерфазы (см. примечание 21). Откладываем в сторону.
\n
9. В оставшийся органический остаток добавляем объем воды, свободной от РНК, эквивалентный водному объ­ему, который был просто перенесен в новую пробирку.
\n
10. Смешиваем на вортексе в течение 30 сек.
\n
11. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре.
\n
12. Переносим приблизительно 90 % верхней водной фазы этой второй экстракции в ту же самую пробир­ку, которая содержит водный объем от первой водной фазы (белки и РНК) (см. примечание 21). Остальная часть с органической фазой теперь может быть выбро­шена (см. примечание 5).
\n
13. Добавляем 1,5 объема 100 % этанола в общий объ­ем полученной жидкости, рассчитанный от удаленного из первого и второго органических экстрактов (см. при­мечание 7).
\n
14. Инвертируем 10 раз для смешивания и даем раство­ру инкубироваться при комнатной температуре в тече­ние 10 мин.
\n
15. Добавляем 700 мкл полученной жидкости в мини­колонки и центрифугируем при 800 об/мин при ком­натной температуре (см. примечание 22), сбрасываем полученную жидкость из сборной пробирки и повто­ряем шаги, пока не закончится исследуемый образец (см. примечание 3).
\n
16. Добавляем 700 мкл подготовленного промывоч­ного раствора 1 в мини-колонки и центрифугируем при 800 об/мин в течение 30 сек. для пропускания рас­твора через мембрану мини-колонок (см. примеча­ния 23 и 22). Сбрасываем полученную жидкость из сбор­ной пробирки (см. примечание 3).
\n
17. Добавляем 500 мкл подготовленного промывочно­го раствора 2/3 в мини-колонки (см. примечание 24) и центрифугируем при 800 об/мин в течение 30 сек. (см. примечание 22). Сбрасываем полученную жид­кость из сборной пробирки.
\n
18. Повторяем шаг
\n
19. Без применения каких-либо других растворов ми­ни-колонки после центрифугирования и их пустые сборные пробирки в течение 30 сек. высушиваются от остаточного этанола.
\n
20. Перемешиваем мини-колонки в новые сборные пробирки (см. примечание 25).
\n
21. Добавляем 100 мкл 95 °С (см. примечание 26) воды, сво­бодной от РНКаз, (см. примечание 6) в мини-колонки и ин­кубируем при комнатной температуре в течение 1 минуты.
\n
22. Центрифугируем при 10,000 об/мин в течение 1 мин для элюирования РНК через мембрану мини-колонок (см. примечание 27).
\n
23. Повторяем шаги 21 и 22.
\n
24. Фильтрующий компонент мини-колонок можно выбросить, поскольку РНК элюируется из фильтра и находится в сборной пробирке.
\n
25. Центрифугируем данные образцы с РНК на макси­мальной скорости в течение 1 мин до выпадения осадка.
\n
26. Избегая осадка, переносим РНК из данной пробирки в новую пробирку. Приступаем к осаждению этанолом для подготовки малых РНК к NGS (см. примечание 27).
\n
27. Добавляем 0,5 объема 7 М ацетата аммония до ко­нечной концентрации 2-2,5 М и хорошо смешиваем (см. примечание 28).
\n
28. Добавляем 4 объема от объема РНК абсолютного спирта и хорошо смешиваем. Инкубируем полученный образец при температуре -20 °С с 4 до 12 часов.
\n
29. Центрифугируем при 16,000 об/мин в течение 30 мин. при 4 °C для осаждения РНК.
\n
30. Промываем полученные гранулы дважды 80 % спиртом.
\n
31. Ресуспендируем гранулы РНК в объеме воды, сво­бодной от РНКаз, следуя стандартному протоколу про­изводителя.
\n

\n

Примечания

\n

\n
1. Комплект MirVana PARIS рассчитан на 40 реакций при использовании протокола, предоставленного про­изводителем, и предлагаемых тканей (см. Руководство пользователя Ambion mirVana PARIS Kit). С модифици­рованным протоколом, описанным здесь, этот комплект представлен приблизительно для 20 мл биожидкости.
\n
2. 2/3 промывочного раствора используется для вто­рой и третьей промывки колонки на основе диоксида кремния, содержащей иммобилизованную РНК.
\n
3. Фильтр мини-колонки и ее сборная пробирка будут повторно использоваться на всех этапах в этом моди­фицированном протоколе, за исключением последнего, в котором завершена изоляция и очистка РНК.
\n
4. Буфер для лизиса клеток включен в список реаген­тов, однако он не будет использоваться для текущего метода, который был разработан для образцов биоло­гических жидкостей.
\n
5. Кислота-фенол-хлороформная основа является ед­кой, поэтому при обращении и утилизации необходимо соблюдать осторожность. Необходимы средства инди­видуальной защиты и использование вытяжного шкафа.
\n
6. В текущем протоколе для элюирования тоталь­ной РНК и ее фракций используют воду, свободную от РНКаз.
\n
7. Поскольку соотношение этанола и водного буфера важно независимо от того, растворена ли РНК, или вы­пала в осадок в растворе, крайне важно использовать абсолютный этанол ACS-класса (ACS — Американское химическое общество) или лучше при приготовлении спиртовых буферных растворов. Каждый раз, когда обезвоженный этанол подвергается воздействию окру­жающей среды, в нем растворяется вода из окружаю­щей среды, что впоследствии уменьшает содержание этанола в растворе ниже по потоку.
\n
8. Из-за соображений безопасности, за исключением по­следнего шага, весь протокол должен выполняться в вы­тяжном шкафу с отрицательным воздушным потоком, предназначенным для летучих химических веществ.
\n
9. Важным аспектом молекулярной функции всех буферов и растворов является их pH. Поскольку тем­пература оказывает существенное влияние на рН, ее следует контролировать. Все описанные здесь шаги выполняются при комнатной температуре, если не указано иное. Однако центрифугирование может увеличить температуру центрифугируемого образца. Таким образом, центрифуги, используемые на этапах центрифугирования без мини-колонок, должны быть установлены на стандартную температуру окружаю­щей среды 25 °С. Для кратковременных этапов центри­фугирования, например для пропускания жидкости через мини-колонки, центрифуга с контролируемой температурой не требуется.
\n
10. Не важно, при какой скорости используется стан­дартный лабораторный орбитально-качающийся шей- кер, если он позволяет тщательно перемешивать замо­роженные образцы в денатурирующем растворе.
\n
11. Мы обнаружили, что сборные пробирки, поставля­емые с комплектом mirVana PARIS Kit, не всегда плот­но закрывались. Кроме того, использование пробирок с неплотно закрывающимися крышками приводит к ис­парению и уменьшает остаточный материал РНК, находя­щийся в сборной пробирке. Поэтому, как только РНК элю­ируется из мини-колонки, ее следует перенести в плотно закрывающуюся стерильную пробирку без РНКаз.
\n
12. Очистим рабочий стол и все оборудование, которое будет использоваться для экстракции РНК, с помощью растворов-дезактиваторов РНКаз или салфеток в со­ответствии с рекомендациями производителя для этих продуктов. Следует принять общие меры предосторож­ности, чтобы свести к минимуму возможное воздей­ствие РНКаз на РНК.
\n
13. Хотя малые РНК относительно стабильны в биоло­гических жидкостях [12], обрабатывая образцы одина­ковым способом, каждый раз можно будет гарантиро­вать минимизацию смещения сбора и сохранить общий профиль тотальной РНК. В замороженных образцах РНКазы неактивны из-за низкой температуры, которая не позволяет воде находиться в жидкой форме, необхо­димой для того, чтобы эти ферменты меняли структуру РНК. Образцы оттаивают в присутствии 2 денатури­рующего раствора, чтобы гарантировать, что РНКазы будут денатурированы, поэтому они необратимо инак­тивируются [11].
\n
14. Набор MirVana PARIS поставляется при комнатной температуре, а компоненты хранятся либо при комнат­ной температуре, либо при температуре 4 °C в соответ­ствии с правилами производителя. Для использования в обычном режиме или в текущем модифицирован­ном протоколе перед использованием компонентов MirVana Paris Kit необходимо довести их до комнатной температуры.
\n
15. В промывочном растворе 2/3 может образовывать­ся осадок белого цвета, но это не имеет никакого значе­ния, и его следует оставить в бутылке при использова­нии этого раствора.
\n
16. 2 денатурирующий раствор образует осадок при ре­комендуемой температуре хранения 4 °C. После про­грева до комнатной температуры нужно осмотреть, остался ли осадок в растворе. Если присутствует твер­дый белый осадок, нужно плотно закрыть бутылку и при 37 °C перемешивать его до полного растворения.
\n
17. Для обеспечения герметичности пробирок и ис­ключения испарения раствора под воздействием повы­шенной температуры и давления при центрифугирова­нии можно использовать алюминиевую фольгу.
\n
18. Оцениваем объем биологического образца. Если пробирка для образцов заполнена больше, чем напо­ловину, нужно предотвратить добавление равного объ­ема 2 денатурирующего раствора и добавить только 1/10 объема 2 денатурирующего раствора, энергично перемешивая до тех пор, пока замороженный образец не будет слегка разморожен. Перенесите этот образец и остаточный раствор в большую пробирку, где есть оставшийся 2 денатурирующий раствор.
\n
19. Небольшой объем водного буфера покрывает орга­ническую кислотно-фенол-хлороформную основу. При использовании этого реагента убедитесь, что присут­ствуют два разных слоя. Следует избегать взбалтыва­ния этого раствора, чтобы слои не смешивались. Если раствор выглядит мутным или присутствуют пузырьки воздуха, следует подождать осаждения до тех пор, пока два слоя не будут заметно разделены. При использова­нии этого раствора обязательно удалите кислотно-фе- нол-хлороформную основу из-под водного буферного слоя. Когда объем раствора уменьшится, обязательно проконтролируйте, что вы удалили эту основу, а не вы­шележащий водный буфер.
\n
20. Стадия фазового разделения фенол-хлороформа включает центрифугирование относительно большого объема. Поэтому рекомендуется, чтобы ротор для цен­трифуги был с регулируемой температурой (см. приме­чание 9) и был совместим с центрифужными пробир­ками. Пробирки должны быть способны удерживать раствор в 5 раз больше своего объема.
\n
21. В зависимости от образцов (биологических жидко­стей) белая интерфаза может и не наблюдаться, особен­но для второй экстракции. При тщательном осмотре фазы должны быть видны и не должны смешиваться при пипетировании верхнего водного объема.
\n
22. Мини-колонки из набора MirVana PARIS были раз­работаны для протокола изготовителя. С помощью модифицированного метода большие объемы, чем пер­воначально предполагалось, проходят через весь стол­бец мини-колонок. Поскольку РНК будет связываться с мембраной (диоксид кремния) столбца мини-коло­нок, лучше всего тщательно поддерживать целостность столбца. Поэтому максимальная скорость центрифуги­рования, рекомендуемая для пропускания водного рас­твора экстракции/этанола, составляет 800 g.
\n
23. Готовый промывочный раствор 1содержит 21 мл 100 % этанола.
\n
24. Готовый промывочный раствор 2/3 содержит 40 мл 100 % этанола.
\n
25. Чтобы предотвратить проникновение высушенно­го остаточного материала в свежий резервуар пробир­ки, очистите внешнюю поверхность колонки фильтра, используя протирание раствором 70 % этанола, но из­бегайте смачивания фильтра.
\n
26. Разогреваем воду, свободную от РНКаз, на тепло­вом блоке до 95 °C и используем эту воду для элюиро­вания РНК из мембраны мини-колонок. Чтобы учесть, что при этой температуре происходит испарение, нуж­но удвоить объем воды, которая будет использоваться, а также она должна быть предварительно нагрета.
\n
27. Если РНК будет использоваться для любых других методов секвенирования, помимо малых РНК, может потребоваться обработка ДНК-образца.
\n
28. Осаждение РНК этанолом должно всегда происхо­дить с добавлением солевых растворов, и они должны быть тщательно перемешаны перед добавлением спирта.
\n

\n

Обсуждение

\n

Мы протестировали различные коммерчески доступные наборы для извлечения РНК и обнаружили, что некото­рые из них были более эффективными при выделении малых РНК из биологических жидкостей, чем другие. Также были проверены модификации протоколов, сде­ланных другими исследователями, для более высокого выхода РНК [13]. Лучшие условия для получения высо­кого выхода малых РНК из биожидкостей описаны в этой методике, так как мы считаем, что она имеет ценность для исследователей, которые планируют работать с NGS. Настоящее исследование специально было разработано и протестировано для изоляции малых РНК из церебро­спинальной жидкости человека для последующей рабо­ты с NGN на платформе Illumina (Illumina, San Fransico, CA, USA). Также метод может быть дополнительно при­менен к образцам слюны и мочи человека [14]. Описанный здесь метод был протестирован и показал, что он улучшает восстановление или выделение малых РНК из цереброспинальной жидкости. Однако этот ме­тод не ограничивается этим типом образцов и может разумно применяться к другим типам биологических жидкостей [15]. Поскольку каждый тип выборки может создавать определенные проблемы, мы настоятельно рекомендуем тестировать различные методы для каж­дого конкретного типа образца, т. е. типа ткани. Доказана роль секвенирования следующего поколения в дифференциальной диагностике сложных новообра­зований. Acosta и др. оценили потенциальное примене­ние NGS в диагностике этих редких новообразований [16]. В исследование были включены четыре новооб­разования. Два были диагностированы как смешанная аденонейроэндокринная карцинома желчного пузыря и метастатический папиллярный рак щитовидной желе­зы с плоскоклеточной дедифференцировкой, а два были интерпретированы как аденокарцинома пищевода в аде­нокарциному легких и мелкоклеточная карцинома лег­кого на/в менингеальную меланому. Это исследование иллюстрирует роль NGS в дифференциальной диагно­стике редких новообразований как дополнения к свето­вой микроскопии и иммуногистохимии.

\n

Заключение

\n

В этой статье мы описали методику для экстракции ма­лых РНК из биологических жидкостей человека для по­следующего секвенирования нового поколения, кото­рую сочли полезной при исследованиях данных типов РНК в качестве потенциальных биомаркеров. Как ука­зано выше, подготовка образцов, выбор реагентов — немаловажные факторы, учитывая текущую нехватку знаний об их влиянии на последующее секвенирование нового поколения малых РНК. Кроме того, тщательно построенный план эксперимента, связанный с выбо­ром типов образцов и техники экстракции малых РНК, важен для получения хороших результатов в работе с секвенированием нового поколения.

"],"dc.authors":["{\"authors\": [{\"ru\": {\"orcid\": \"0000-0002-6149-5460\", \"affiliation\": \"\\u0411\\u0430\\u0448\\u043a\\u0438\\u0440\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0433\\u043e\\u0441\\u0443\\u0434\\u0430\\u0440\\u0441\\u0442\\u0432\\u0435\\u043d\\u043d\\u044b\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0443\\u043d\\u0438\\u0432\\u0435\\u0440\\u0441\\u0438\\u0442\\u0435\\u0442\", \"full_name\": \"\\u041e. \\u0410. \\u0411\\u0435\\u0439\\u043b\\u0435\\u0440\\u043b\\u0438\"}, \"en\": {\"orcid\": \"0000-0002-6149-5460\", \"affiliation\": \"Bashkir State Medical University\", \"full_name\": \"O. A. Beylerli\"}}, {\"ru\": {\"orcid\": \"0000-0002-3486-6246\", \"affiliation\": \"\\u0411\\u0430\\u0448\\u043a\\u0438\\u0440\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0433\\u043e\\u0441\\u0443\\u0434\\u0430\\u0440\\u0441\\u0442\\u0432\\u0435\\u043d\\u043d\\u044b\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0443\\u043d\\u0438\\u0432\\u0435\\u0440\\u0441\\u0438\\u0442\\u0435\\u0442\", \"full_name\": \"\\u0410. \\u0422. \\u0411\\u0435\\u0439\\u043b\\u0435\\u0440\\u043b\\u0438\"}, \"en\": {\"orcid\": \"0000-0002-3486-6246\", \"affiliation\": \"Bashkir State Medical University\", \"full_name\": \"A. T Beylerli\"}}, {\"ru\": {\"orcid\": \"0000-0002-4965-0835\", \"affiliation\": \"\\u0411\\u0430\\u0448\\u043a\\u0438\\u0440\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0433\\u043e\\u0441\\u0443\\u0434\\u0430\\u0440\\u0441\\u0442\\u0432\\u0435\\u043d\\u043d\\u044b\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0443\\u043d\\u0438\\u0432\\u0435\\u0440\\u0441\\u0438\\u0442\\u0435\\u0442\", \"full_name\": \"\\u0418. \\u0424. \\u0413\\u0430\\u0440\\u0435\\u0435\\u0432\"}, \"en\": {\"orcid\": \"0000-0002-4965-0835\", \"affiliation\": \"Bashkir State Medical University\", \"full_name\": \"I. F. Garaev\"}}]}"],"publication_grp":["123456789/4375"],"bi_4_dis_filter":["small rna\n|||\nsmall RNA","biological fluids\n|||\nbiological fluids","секвенирование нового поколения\n|||\nсеквенирование нового поколения","биологические жидкости\n|||\nбиологические жидкости","цереброспинальная жидкость\n|||\nцереброспинальная жидкость","малые рнк\n|||\nмалые РНК","next-generation sequencing\n|||\nnext-generation sequencing","cerebrospinal fluid\n|||\ncerebrospinal fluid","экстракция рнк\n|||\nэкстракция РНК","rna extraction\n|||\nRNA extraction"],"bi_4_dis_partial":["RNA extraction","секвенирование нового поколения","биологические жидкости","next-generation sequencing","cerebrospinal fluid","экстракция РНК","small RNA","цереброспинальная жидкость","малые РНК","biological fluids"],"bi_4_dis_value_filter":["RNA extraction","секвенирование нового поколения","биологические жидкости","next-generation sequencing","cerebrospinal fluid","экстракция РНК","small RNA","цереброспинальная жидкость","малые РНК","biological fluids"],"bi_sort_1_sort":"extracting small rnas from human biological fluids for subsequent next-generation sequencing","bi_sort_3_sort":"2019-10-16T13:14:19Z","read":["g0"],"_version_":1697558553268584448},{"SolrIndexer.lastIndexed":"2021-06-15T06:55:36.376Z","search.uniqueid":"2-4332","search.resourcetype":2,"search.resourceid":4332,"handle":"123456789/5237","location":["m195","l691"],"location.comm":["195"],"location.coll":["691"],"withdrawn":"false","discoverable":"true","dc.abstract":["Infections associated with health care (IAHC) or nosocomial infection (NI) (Healthcare associated infections - HAIS) are infections acquired by patients during treatment and medical care. Surgical site infections (SSI), according to WHO are the most frequent type of nosocomial infection in countries with middle income. SSI is found in 1/3 of patients after surgical intervention. The review provides data about the epidemiology and prevalence of SSO and describes methods of preoperative prevention.","Инфекции, ассоциированные с оказанием медицинской помощи (ИАМП), или внутрибольничные инфекции (ВБИ) (Healthcare associated infections - HAIS) - это инфекции, приобретённые пациентами в процессе лечения и ухода. Инфекционное поражение области хирургического вмешательства (ИOXB, SSI - Surgical site infection) по данным ВОЗ - наиболее частый вид внутрибольничной инфекции (ВБИ) в странах со средним уровнем дохода. ИОХВ встречается у 1/3 больных, перенесших хирургические вмешательства. В обзоре приводятся данные об эпидемиологии и распространенности ИОХВ, а также описываются методы предоперационной профилактики."],"dc.abstract.en":["Infections associated with health care (IAHC) or nosocomial infection (NI) (Healthcare associated infections - HAIS) are infections acquired by patients during treatment and medical care. Surgical site infections (SSI), according to WHO are the most frequent type of nosocomial infection in countries with middle income. SSI is found in 1/3 of patients after surgical intervention. The review provides data about the epidemiology and prevalence of SSO and describes methods of preoperative prevention."],"dc.abstract.ru":["Инфекции, ассоциированные с оказанием медицинской помощи (ИАМП), или внутрибольничные инфекции (ВБИ) (Healthcare associated infections - HAIS) - это инфекции, приобретённые пациентами в процессе лечения и ухода. Инфекционное поражение области хирургического вмешательства (ИOXB, SSI - Surgical site infection) по данным ВОЗ - наиболее частый вид внутрибольничной инфекции (ВБИ) в странах со средним уровнем дохода. ИОХВ встречается у 1/3 больных, перенесших хирургические вмешательства. В обзоре приводятся данные об эпидемиологии и распространенности ИОХВ, а также описываются методы предоперационной профилактики."],"dc.author.affiliation":["ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","ГБУЗ РБ «Больница скорой медицинской помощи»","ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России"],"dc.author.affiliation.ru":["ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","ГБУЗ РБ «Больница скорой медицинской помощи»","ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России"],"dc.author.full":["Ш. В. Тимербулатов | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","Sh. V. Timerbulatov |","Р. М. Гарипов | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","R. M. Garipov |","М. В. Тимербулатов | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","M. V. Timerbulatov |","Э. Н. Гайнуллина | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","E. N. Gainullina |","А. М. Саргсян | ГБУЗ РБ «Больница скорой медицинской помощи»","A. M. Sargsyan |","Е. А. Грушевская | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","E. A. Grushevskaya |"],"dc.author.full.ru":["Ш. В. Тимербулатов | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","Р. М. Гарипов | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","М. В. Тимербулатов | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","Э. Н. Гайнуллина | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России","А. М. Саргсян | ГБУЗ РБ «Больница скорой медицинской помощи»","Е. А. Грушевская | ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России"],"dc.author.full.en":["Sh. V. Timerbulatov |","R. M. Garipov |","M. V. Timerbulatov |","E. N. Gainullina |","A. M. Sargsyan |","E. A. Grushevskaya |"],"author":["Ш. В. Тимербулатов","Sh. V. Timerbulatov","Р. М. Гарипов","R. M. Garipov","М. В. Тимербулатов","M. V. Timerbulatov","Э. Н. Гайнуллина","E. N. Gainullina","А. М. Саргсян","A. M. Sargsyan","Е. А. Грушевская","E. A. Grushevskaya"],"author_keyword":["Ш. В. Тимербулатов","Sh. V. Timerbulatov","Р. М. Гарипов","R. M. Garipov","М. В. Тимербулатов","M. V. Timerbulatov","Э. Н. Гайнуллина","E. N. Gainullina","А. М. Саргсян","A. M. Sargsyan","Е. А. Грушевская","E. A. Grushevskaya"],"author_ac":["ш. в. тимербулатов\n|||\nШ. В. Тимербулатов","sh. v. timerbulatov\n|||\nSh. V. Timerbulatov","р. м. гарипов\n|||\nР. М. Гарипов","r. m. garipov\n|||\nR. M. Garipov","м. в. тимербулатов\n|||\nМ. В. Тимербулатов","m. v. timerbulatov\n|||\nM. V. Timerbulatov","э. н. гайнуллина\n|||\nЭ. Н. Гайнуллина","e. n. gainullina\n|||\nE. N. Gainullina","а. м. саргсян\n|||\nА. М. Саргсян","a. m. sargsyan\n|||\nA. M. Sargsyan","е. а. грушевская\n|||\nЕ. А. Грушевская","e. a. grushevskaya\n|||\nE. A. Grushevskaya"],"author_filter":["ш. в. тимербулатов\n|||\nШ. В. Тимербулатов","sh. v. timerbulatov\n|||\nSh. V. Timerbulatov","р. м. гарипов\n|||\nР. М. Гарипов","r. m. garipov\n|||\nR. M. Garipov","м. в. тимербулатов\n|||\nМ. В. Тимербулатов","m. v. timerbulatov\n|||\nM. V. Timerbulatov","э. н. гайнуллина\n|||\nЭ. Н. Гайнуллина","e. n. gainullina\n|||\nE. N. Gainullina","а. м. саргсян\n|||\nА. М. Саргсян","a. m. sargsyan\n|||\nA. M. Sargsyan","е. а. грушевская\n|||\nЕ. А. Грушевская","e. a. grushevskaya\n|||\nE. A. Grushevskaya"],"dc.author.name":["Ш. В. Тимербулатов","Sh. V. Timerbulatov","Р. М. Гарипов","R. M. Garipov","М. В. Тимербулатов","M. V. Timerbulatov","Э. Н. Гайнуллина","E. N. Gainullina","А. М. Саргсян","A. M. Sargsyan","Е. А. Грушевская","E. A. Grushevskaya"],"dc.author.name.ru":["Ш. В. Тимербулатов","Р. М. Гарипов","М. В. Тимербулатов","Э. Н. Гайнуллина","А. М. Саргсян","Е. А. Грушевская"],"dc.author.name.en":["Sh. V. Timerbulatov","R. M. Garipov","M. V. Timerbulatov","E. N. Gainullina","A. M. Sargsyan","E. A. Grushevskaya"],"dc.authors":["{\"authors\": [{\"ru\": {\"affiliation\": \"\\u0424\\u0413\\u0411\\u041e\\u0423 \\u0412\\u041e \\u00ab\\u0411\\u0430\\u0448\\u043a\\u0438\\u0440\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0433\\u043e\\u0441\\u0443\\u0434\\u0430\\u0440\\u0441\\u0442\\u0432\\u0435\\u043d\\u043d\\u044b\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0443\\u043d\\u0438\\u0432\\u0435\\u0440\\u0441\\u0438\\u0442\\u0435\\u0442\\u00bb \\u041c\\u0438\\u043d\\u0437\\u0434\\u0440\\u0430\\u0432\\u0430 \\u0420\\u043e\\u0441\\u0441\\u0438\\u0438\", \"full_name\": \"\\u0428. \\u0412. \\u0422\\u0438\\u043c\\u0435\\u0440\\u0431\\u0443\\u043b\\u0430\\u0442\\u043e\\u0432\"}, \"en\": {\"affiliation\": \"\", \"full_name\": \"Sh. V. Timerbulatov\"}}, {\"ru\": {\"affiliation\": \"\\u0424\\u0413\\u0411\\u041e\\u0423 \\u0412\\u041e \\u00ab\\u0411\\u0430\\u0448\\u043a\\u0438\\u0440\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0433\\u043e\\u0441\\u0443\\u0434\\u0430\\u0440\\u0441\\u0442\\u0432\\u0435\\u043d\\u043d\\u044b\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0443\\u043d\\u0438\\u0432\\u0435\\u0440\\u0441\\u0438\\u0442\\u0435\\u0442\\u00bb \\u041c\\u0438\\u043d\\u0437\\u0434\\u0440\\u0430\\u0432\\u0430 \\u0420\\u043e\\u0441\\u0441\\u0438\\u0438\", \"full_name\": \"\\u0420. \\u041c. \\u0413\\u0430\\u0440\\u0438\\u043f\\u043e\\u0432\"}, \"en\": {\"affiliation\": \"\", \"full_name\": \"R. M. Garipov\"}}, {\"ru\": {\"affiliation\": \"\\u0424\\u0413\\u0411\\u041e\\u0423 \\u0412\\u041e \\u00ab\\u0411\\u0430\\u0448\\u043a\\u0438\\u0440\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0433\\u043e\\u0441\\u0443\\u0434\\u0430\\u0440\\u0441\\u0442\\u0432\\u0435\\u043d\\u043d\\u044b\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0443\\u043d\\u0438\\u0432\\u0435\\u0440\\u0441\\u0438\\u0442\\u0435\\u0442\\u00bb \\u041c\\u0438\\u043d\\u0437\\u0434\\u0440\\u0430\\u0432\\u0430 \\u0420\\u043e\\u0441\\u0441\\u0438\\u0438\", \"full_name\": \"\\u041c. \\u0412. \\u0422\\u0438\\u043c\\u0435\\u0440\\u0431\\u0443\\u043b\\u0430\\u0442\\u043e\\u0432\"}, \"en\": {\"affiliation\": \"\", \"full_name\": \"M. V. Timerbulatov\"}}, {\"ru\": {\"affiliation\": \"\\u0424\\u0413\\u0411\\u041e\\u0423 \\u0412\\u041e \\u00ab\\u0411\\u0430\\u0448\\u043a\\u0438\\u0440\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0433\\u043e\\u0441\\u0443\\u0434\\u0430\\u0440\\u0441\\u0442\\u0432\\u0435\\u043d\\u043d\\u044b\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0443\\u043d\\u0438\\u0432\\u0435\\u0440\\u0441\\u0438\\u0442\\u0435\\u0442\\u00bb \\u041c\\u0438\\u043d\\u0437\\u0434\\u0440\\u0430\\u0432\\u0430 \\u0420\\u043e\\u0441\\u0441\\u0438\\u0438\", \"full_name\": \"\\u042d. \\u041d. \\u0413\\u0430\\u0439\\u043d\\u0443\\u043b\\u043b\\u0438\\u043d\\u0430\"}, \"en\": {\"affiliation\": \"\", \"full_name\": \"E. N. Gainullina\"}}, {\"ru\": {\"affiliation\": \"\\u0413\\u0411\\u0423\\u0417 \\u0420\\u0411 \\u00ab\\u0411\\u043e\\u043b\\u044c\\u043d\\u0438\\u0446\\u0430 \\u0441\\u043a\\u043e\\u0440\\u043e\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u043e\\u0439 \\u043f\\u043e\\u043c\\u043e\\u0449\\u0438\\u00bb\", \"full_name\": \"\\u0410. \\u041c. \\u0421\\u0430\\u0440\\u0433\\u0441\\u044f\\u043d\"}, \"en\": {\"affiliation\": \"\", \"full_name\": \"A. M. Sargsyan\"}}, {\"ru\": {\"affiliation\": \"\\u0424\\u0413\\u0411\\u041e\\u0423 \\u0412\\u041e \\u00ab\\u0411\\u0430\\u0448\\u043a\\u0438\\u0440\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0433\\u043e\\u0441\\u0443\\u0434\\u0430\\u0440\\u0441\\u0442\\u0432\\u0435\\u043d\\u043d\\u044b\\u0439 \\u043c\\u0435\\u0434\\u0438\\u0446\\u0438\\u043d\\u0441\\u043a\\u0438\\u0439 \\u0443\\u043d\\u0438\\u0432\\u0435\\u0440\\u0441\\u0438\\u0442\\u0435\\u0442\\u00bb \\u041c\\u0438\\u043d\\u0437\\u0434\\u0440\\u0430\\u0432\\u0430 \\u0420\\u043e\\u0441\\u0441\\u0438\\u0438\", \"full_name\": \"\\u0415. \\u0410. \\u0413\\u0440\\u0443\\u0448\\u0435\\u0432\\u0441\\u043a\\u0430\\u044f\"}, \"en\": {\"affiliation\": \"\", \"full_name\": \"E. A. Grushevskaya\"}}]}"],"dc.citation":["Paint-only is equivalent to scrub-and-paint in preoperative preparation of abdominal surgery sites. Ellenhorn J.D. [et al.] // J. Am. Coll. Surg. - 2005; Vol. 201(5) p.:737-41","Effect of pre-operative skin preparation on postoperative wound infection. Shirahatti R.G. [et al.] // J. Postgrad. Med. - 1993; Vol.:39(3) p.:134-6","Segal C.G. Preoperative skin preparation of cardiac patients / Segal C.G., Anderson J.J. // AORN J. - 2002 - Vol.:76 (5) p.:821-8","Rodrigues A.L. Incidence of surgical site infection with pre-operative skin preparation using 10% polyvidone-iodine and 0.5% chlorhexidine-alcohol / Rodrigues A.L., Simoes Mde L. // Rev. Col. Bras. Cir. - 2013 Vol.: 40(6) p.:443-8","Minimizing wound contamination in a ‘clean’ surgery: comparison of chlorhexidine-ethanol and povidone-iodine. Sistla S.C. [et al.] // Chemotherapy. - 2010. - Vol.:56(4) p.:261-7","Comparison of the efficacy of chlorhexidine gluconate versus povidone iodine as preoperative skin preparation for the prevention of surgical site infections in clean-contaminated upper abdominal surgeries. Srinivas A. [et al.] // Surg. Today - 2014. - Vol.:45 p.:1378-84","Paocharoen V. Comparison of surgical wound infection after preoperative skin preparation with 4% chlohexidine and povidone iodine: A prospective randomized trial. Paocharoen V., Mingmalairak C., Apisarnthanarak A. // J. Med. Associ. Thai. - 2009. - Vol.:92(7) p.:898-902","Chlorhexidine-alcohol versus povidone-iodine for surgical-site antisepsis / Darouiche R.O. [et al.] // New Engl. J. Med. - 2010. - Vol.:362 p.:18-26","Efficacy of surgical preparation solutions in lumbar spine surgery / Savage J.W. [et al.] // J. Bone Joint Surg. (Am). - 2012 - Vol.:94 p.: 490-4","A randomized trial comparing skin antiseptic agents at cesarean delivery / Tuuli M.G. [et al.] // New Engl. J. Med. - 2016 - Vol.:374(7) p.: 647-55","Systematic review and cost analysis comparing use of chlorhexidine with use of iodine for preoperative skin antisepsis to prevent surgical site infection / Lee I. [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2010. - Vol.:31(12) p.:1219-29","Guideline for prevention of surgical site infection, 1999. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Mangram A.J. [et al.] // Am. J. Infect. Control. - 1999 - Vol.: 27(2) p.: 97-132; quiz 3-4; discussion 96","Dohmen P.M. Impact of antimicrobial skin sealants on surgical site infections / Dohmen P.M. - Surg. Infect. (Larchmt) - 2014. - Vol.:15(4) p.:368-71","Influence of preoperative skin sealing with cyanoacrylate on microbial contamination of surgical wounds following trauma surgery: a prospective, blinded, controlled observational study. Daeschlein G. [et al.] // Int. J. Infect. Dis. - 2014 - Vol.: 29 p.: 274-8","Microbial sealants do not decrease surgical site infection for clean-contaminated colorectal procedures. / Doorly [et al.] // M. Tech. Coloproctol. - 2015 - Vol.:19(5) p.:281-5","Efficacy of integuseal for surgical skin preparation in children and adolescents undergoing scoliosis correction / Dromzee E. [et al.] // Spine. - 2012 - Vol.:37(21) p.:e1331-5","Bacterial growth and wound infection following saphenous vein harvesting in cardiac surgery: a randomized controlled trial of the impact of microbial skin sealant / Falk-Brynhildsen K. [et al.] // Europ. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2014 - Vol.:33(11) p.:1981-7","Reduction of surgical site infection using a microbial sealant: a randomized trial / Iyer A. [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2011. - Vol.: 142(2) p.: 438-42","Significant reduction in incidence of wound contamination by skin flora through use of microbial sealant / Towfigh S [et al.] // Arch Surg. - 2008 - Vol.: 143(9) p.: 885-91; discussion 91","Cyanoacrylate skin microsealant for preventing surgical site infection after vascular surgery: a discontinued randomized clinical trial / Vierhout B.P. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2014 - Vol.: 15(4) p.: 425-30","A randomized trial of a skin sealant to reduce the risk of incision contamination in cardiac surgery / von Eckardstein A.S. [et al.] // Ann. Thorac. Surg. - 2011 Vol.: 92(2) p.: 632-7","Roy P. Serious adverse events after microbial sealant application in paediatric patients / Roy P., Loubiere A., Vaillant T., Edouard B. // Ann Pharm Fr. - 2014 - Vol.: 72(6) p.: 409-14","Cyanoacrylate microbial sealants for skin preparation prior to surgery / Lipp A. [et al.] // Cochrane Database Syst. Rev. - 2013 Vol: 8:CD008062","WHO guidelines on hand hygiene in health care. Geneva: World Health Organization - 2009 - URL: http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/44102/1/9789241597906_eng.pdf (accessed 24 July 2016)","Clusterrandomized, crossover trial of the efficacy of plain soap and water versus alcohol-based rub for surgical hand preparation in a rural hospital in Kenya. Nthumba P.M. [ et al.] // Br. J. Surg. - 2010 - Vol.: (11) p.:1621-8","Alcohol-based hand-rub versus traditional surgical scrub and the risk of surgical site infection: a randomized controlled equivalent trial / Al-Naami M.Y. [et al.]// EWMA J. - 2009 - Vol.: 9(3) p.:5-10","Weight C.J. Avagard hand antisepsis vs. traditional scrub in 3600 pediatric urologic procedures / Weight C.J., Lee M.C., Palmer J.S// Urology - 2010 - Vol.: 76(1) p.:15-7","Clinical implementation of a scrubless chlorhexidine/ethanol pre-operative surgical handrub / Marchand R. [ et al.] // Can. Oper. Room. Nurs. J. - 2008 - Vol.: 26(2) p.:21-2, 6, 9-2231","Value of hand disinfection by rubbing with alcohol prior to surgery in a tropical setting / Adjoussou S. [et al.] // Med. Trop. - 2009 - Vol.:69(5) p.: 463-6","Mainous M.R. Nutrition and infection / Mainous M.R., Deitch E.A. // Surg Clin North Am. -1994 - Vol.:74(3) p.: 659-76","Culebras J.M. Malnutrition in the twenty-first century: an epidemic affecting surgical outcome. / Culebras J.M. // Surg. Infect (Larchmt) - 2013 Vol.: 14(3) p.: 237-43","Waitzberg D.L., Ravacci G.R., Raslan M. Hospital hyponutrition / Waitzberg D.L., Ravacci G.R., Raslan M. // Nutr Hosp. - 2011 Vol.: 26(2) p.: 254-64","Studley H.O. Percentage of weight loss: a basic indicator of surgical risk in patients with chronic peptic ulcer. 1936. / Studley H.O.// Nutr. Hosp. - 2001 Vol.: 16(4) p.:141-3; discussion 0-1","Nutrition in the surgical patient: immunonutrition / Culebras-Fernandez J.M. [et al.] // Nutr Hosp. - 2001 Vol.: 16(3) p.: 67-77","Fry D.E. Fifty ways to cause surgical site infections. Surg. Infect. / Fry D.E. // Larchmt. - 2011 - Vol.: 12(6) p.:497-500","Di Carlo V. Complications of pancreatic surgery and the role of perioperative nutrition. [et al.] // Dig. Surg. - 1999. - Vol.: 16(4) p.: 320-6","Mazaki T., Ishii Y., Murai I. Immunoenhancing enteral and parenteral nutrition for gastrointestinal surgery: a multiple-treatments metaanalysis. / Mazaki T., Ishii Y., Murai I. // Ann. Surg. - 2015 - Vol.: 261(4) p.: 662-9","The impact of perioperative glutamine-supplemented parenteral nutrition on outcomes of patients undergoing abdominal surgery: a meta-analysis of randomized clinical trials / Yue C. [et al.]// Am. Surg. - 2013. - Vol.: 79(5) p.: 506-13","The role of immunonutrition in gynecologic oncologic surgery / Celik J.B. [et al.] // Europ. J. Gynaecol. Oncol. - 2009 - Vol.: 30(4) p.: 418-21","Reduced infections with perioperative immunonutrition in head and neck cancer: exploratory results of a multicenter, prospective, randomized, doubleblind study /Falewee M.N. [et al.] // Clin. Nutr. - 2014 - Vol.: 33(5) p.: 776-84","Prospective randomized trial of preoperative enteral immunonutrition followed by elective total gastrectomy for gastric cancer / Fujitani K. [et al.] // Br. J. Surg. - 2012 - Vol.: 99(5) p.: 621-9","The immunomodulating enteral nutrition in malnourished surgical patients - a prospective, randomized, double-blind clinical trial / Klek S. [et al.] // Clin. Nutr. - 2011 - Vol.: 30(3) p.: 282-8","Effect of preoperative oral immuneenhancing nutritional supplement on patients at high risk of infection after cardiac surgery: a random- ised placebo-controlled trial. / Tepaske R. [et al.] // Lancet. - 2001 - Vol.: 358(9283) p.: 696-701","Immunoenhanced enteral nutrition formulas in head and neck cancer surgery: a prospective, randomized clinical trial / Casas-Rodera P. [et al.] // Nutr. Hosp. - 2008 - Vol.: 23(2) p.: 105-10","Randomized clinical trial with an enteral arginine-enhanced formula in early postsurgical head and neck cancer patients / de Luis D.A. [et al.] // Europ. J. Clin. Nutr. - 2004 - Vol.: 58(11) p.: 1505-8","High dose of arginine enhanced enteral nutrition in postsurgical head and neck cancer patients. A randomized clinical trial. / De Luis DA. [et al.] // Europ. Rev. Med. Pharmacol. Sci. - 2009 - Vol.: 13(4) p.: 279-83","Effects of branched-chain amino acids-enriched nutrient support for patients undergoing liver resection for hepatocellular carcinoma / Okabayashi T. [et al.]// J. Gastroenterol Hepatol. - 2008 - Vol.: 23(12) p.: 1869-73","Berthold E. Continuation of TNF blockade in patients with inflammatory rheumatic disease. An observational study on surgical site infections in 1,596 elective orthopedic and hand surgery procedures / Berthold E., Geborek P., Gulfe A.// Acta Orthop. - 2013 - Vol.: 84(5) p.: 495-501","Immunosuppressive therapy does not increase operative morbidity in patients with Crohn's disease / Bafford AC [et al.] // J. Clin. Gastroenterol. - 2013 - Vol.:47(6) p.: 491-5","Strategies to prevent surgical site infectionsion acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. - 2014 - 35(6) p.: 605-27","Effects of supplemental oxygen and dexamethasone on surgical site infection: a factorial randomized trial double dagger / Kurz A. [et al.] // Br. J. Anaesth. -2015 - Vol.: 115(3) p.: 434-43","The role of oxygen in wound healing: a review of the literature. / Rodriguez P.G. [et al.] // Dermatol Surg. - 2008 - Vol.: 34(9) p.: 1159-69","Wound hypoxia and acidosis limit neutrophil bacterial killing mechanisms / Allen D.B. [et al.]// Arch Surg. - 1997 - Vol.: 132(9) p.: 991-6","Hays R.C. PO2, pH, and redox potential of experimental abscesses / Hays R.C., Mandell G.L. // Proc. Soc. Exper. Biol. Medic. Soc. - 1974 - vol.: 147(1) p.: 29-30","Improving surgical site infection prevention practices through a multifaceted educational intervention /Owens P. [et al.] // Ir. Med J. - 2015 - Vol.: 108(3) p.: 78-81","Guidelines: Prevention and treatment of surgical site infection: Summary of NICE guidance. / Leaper D. [et al.] // BMJ. - 2008 - Vol.: 337(7677) p.: 1049-51","Strategies to prevent surgical site infections in acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. - 2014 - Vol.: 35(06) p.: 605-27","Increased long-term mortality after a high perioperative inspiratory oxygen fraction during abdominal surgery: follow-up of a randomized clinical trial / Meyhoff C.S [et al.] // Anesth. Analg. - 2012 - Vol.: 115(4) p.: 849-54","Avoidance of nitrous oxidefor patients undergoing major surgery: a randomized controlled trial. / Myles P.S. [et al.] // Anesthesiology. - 2007 - Vol.: 107(2) p.: 221-31","Hall J.E. Textbook of medical physiology. 12th edition. / Hall J.E., Guyton A.C., editors. // London: Elsevier Saunders; - 2011","Sessler D.I. Mild perioperative hypothermia. / Sessler D.I. // New Engl. J. Med. - 1997 - Vol.: 336(24) p.: 1730-7","Sessler D.I. Physiologic responses to mild perianesthetic hypothermia in humans. / Sessler D.I., Rubinstein E.H., Moayeri A. // Anesthesiology. - 1991 - Vol.: 75(4) p.: 594-610","The effects of mild perioperative hypothermia on blood loss and transfusion requirement. / Rajagopalan S. [et al.] // Anesthesiology. - 2008 - Vol.: 108(1) p.: 71-7","Mild hypothermia alters propofol Pharm acokinetics and increases the duration of action of atracurium. / Leslie K. [et al.] // Anesthes Analg. - 1995 - Vol.: 80(5) p.: 1007-14","The effects of local warming on surgical site infection / Whitney J.D. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2015 - Vol.: 16(5) p.: 595-603","Torossian A. Thermal management during anaesthesia and thermoregulation standards for the prevention of inadvertent perioperative hypothermia. / Torossian A. // Best Pract. Res Clin. Anaesthesiol. - 2008 - Vol.: 22(4) p.: 659-68","Kurz A. Perioperative normothermia to reduce the incidence of surgical-wound infection and shorten hospitalization. Study of Wound Infection and Temperature Group. Kurz A., Sessler D.I., Lenhardt R. New Engl. J. Med. - 1996 - Vol.: 334(19) p.: 1209-15","Effects of preoperative warming on the incidence of wound infection after clean surgery: a randomised controlled trial. / Melling A.C. [et al.] // Lancet. - 2001 Vol.: 358(9285) p.: 876-80","Perioperative cost-finding analysis of the routine use of intraoperative forced-air warming during general anesthesia. / Fleisher L.A. [et al.] // Anesthesiology. - 1998 Vol.: 88(5) p.: 1357-64","Mahoney C.B. Maintaining intraoperative normothermia: a metaanalysis of outcomes with costs. / Mahoney C.B., Odom J. // AANA J. - 1999 - Vol.: 67(2) p.: 155-63","Berry D. A clinical evaluation of the cost and time effectiveness of the ASPAN hypothermia guideline. / Berry D., Wick C., Magons P. // J. Perianesthes Nurs. - 2008 - Vol.: 23(1) p.: 24-35","Postoperative hyperglycemia and surgical site infection in general surgery patients /Ata A. [et al.] // Arch. Surg. - 2010 - Vol.: 145(9) p.: 858-64","Kao L.S. Glycemic control and prevention of surgical site infection. / Kao L.S., Phatak U.R. // Surg. Infect. (Larchmt). - 2013 - Vol.: 14(5) p.: 437-44","Perioperative hyperglycemia and risk of adverse events among patients with and without diabetes. /Kotagal M. [et al.] // Ann Surg. - 2015 - Vol.: 261(1) p.: 97-103","Stress hyperglycemia and surgical site infection in stable nondiabetic adults with orthopedic injuries / Richards J.E. [ et al.] // J. Trauma Acute Care Surg. - 2014 Vol.: 76(4) p.: 1070-5","Emam I.A. [et al.] //Our experience of controlling diabetes in the perioperative period of patients who underwent cardiac surgery. Diabetes Res. Clin. Pract. - 2010 - Vol.: 88(3) p.: 242-6","Does continuous insulin therapy reduce postoperative supraventricular tachycardia incidence after coronary artery bypass operations in diabetic patients? / Kirdemir P. [et al.] // J. Cardiothorac. Vasc. Anesth. - 2008 - Vol.: 22(3) p.: 383-7","Intensive versus conventional glycemic control in patients with diabetes during enteral nutrition after gastrectomy / Yuan J. [et al.] // J. Gastrointest. Surg. - 2015 19(8):1553-8","Effects of intravenous fluid restriction on postoperative complications: comparison of two perioperative fluid regimens: a randomized assessor-blinded multicenter trial. / Brandstrup B. [et al.] // Ann. Surg. - 2003 - Vol.: 238(5) p.: 641-8","Supplemental intravenous crystalloid administration does not reduce the risk of surgical wound infection. / Kabon B. [et al.] // Anesth Analg. - 2005 - Vol.: 101(5) p.: 1546-53","Randomised controlled trial assessing the impact of a nurse delivered, flow monitored protocol for optimisation of circulatory status after cardiac surgery / McKendry M. [et al.] // BMJ. 2004 - Vol.: 329(7460) p.: 258","Early goal-directed therapy after major surgery reduces complications and duration of hospital stay. A randomised, controlled trial [ISRCTN38797445]. / Pearse R. [et al.] // Crit Care. - 2005 - Vol.: 9(6) p.: R687-93","Intravenous fluid restriction after major abdominal surgery: a randomized blinded clinical trial. / Vermeulen H. [et al.] // Trials. - 2009 - Vol.: 10 p.: 50","Effect of intraoperative fluid management on outcome after intraabdominal surgery. / Nisanevich V. [et al.] // Anesthesiology. 2005 - Vol.: 103(1) p.:25-32","Ring drape do not protect against surgical site infections in colorectal surgery: a randomised controlled study / Baier P. [et al.] // Int. J. Colorectal. Dis. - 2012 Vol.: 27(9) p.: 1223-8","Multicenter double-blinded randomized controlled trial of standard abdominal wound edge protection with surgical dressings versus coverage with a sterile circular polyethylene drape for prevention of surgical site infections: a CHIRNet trial (BaFO; NCT01181206). /Mihaljevic A.L. [et al.]// Ann Surg. - 2014 - Vol.: 260(5) p.: 730-7; discussion 7-9","Impact of wound edge protection devices on surgical site infection after laparotomy: multicentre randomised controlled trial (ROSSINI Trial). / Pinkney T.D. [et al.] // BMJ. - 2013 - Vol.: 347 p.: f4305","Use of an impervious wound-edge protector to reduce the postoperative wound infection rate / Redmond H.P. [et al.] // Br. J. Surg. - 1994 - Vol.: 81(1811)","ALEXIS O-Ring wound retractor vs conventional wound protection for the prevention of surgical site infections in colorectal resections (1). / Cheng K.P. [et al.] // Colorectal Dis. - 2012 - Vol.: 14(6) p.: e346-51","Barrier wound protection decreases surgical site infection in open elective colorectal surgery: a randomized clinical trial. /Reid K. [et al.] // Dis Colon Rectum. - 2010 - Vol.: 53(10) p.: 1374-80","A prospective randomized study for evaluation of wound retractors in the prevention of incision site infections after cesarean section. / Theodoridis T.D. [et al.] // Clin Exper Obstet Gynecol. - 2011 - Vol.: 38(1) p.:57-9","Efficacy of dilute betadine solution irrigation in the prevention of postoperative infection of spinal surgery. / Cheng M.T. [et al.] // Spine. - 2005 - Vol.: 30(15) p.:1689-93","Can povidoneiodine solution be used safely in a spinal surgery? / Chang F.Y. [et al.] // Europ. Spine J. - 2006 - Vol.: 15(6) p.:1005-14","Rogers D.M. Povidoneiodine wound irrigation and wound sepsis. / Rogers D.M., Blouin G.S., O'Leary J.P. // Surg. Gynecol. Obstet. - 1983 - Vol.: 157(5) p.: 426-30","Combined topical povidone-iodine and systemic antibiotics in postappendicectomy wound sepsis. / Lau W.Y. [et al.] // Br. J. Surg. - 1986 - Vol.: 73(12) p.: 958-60","Intra-operative peritoneal lavage--who does it and why? /Whiteside O.J. [et al.] // Ann. R. Col. Surg. Engl. - 2005 - Vol.: 87(4) p.: 255-8","Measures to prevent surgical site infections: what surgeons (should) do. / Diana M. [et al.] // World J. Surg. - 2011 - Vol.: 35(2) p.: 280-8","Survey of intraoperative povidoneiodine application to prevent surgical site infection in a French region. / Pivot D. [et al.] // J. Hosp. Infection. - 2011 - Vol.: 77(4):363-4","Strategies to prevent surgical site infections in acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2014 - Vol.: 35(6) p.: 605-27","Toxic effects of wound irrigation solutions on cultured tibiae and osteoblasts. / Kaysinger K.K. [et al.] // J. Orthop Trauma. - 1995 - Vol.: 9(4) p.: 303-11","Cellular and bacterial toxicities of topical antimicrobials. / Lineaweaver W. [et al.] // Plast. Reconstr. Surg. - 1985 - Vol.: 75(3) p.: 394-6","lister formation with negative pressure dressings after total knee arthroplasty. /Howell R.D. [et al.] // Curr. Orthop. Pract. - 2011 - Vol.: 22(2) p.: 176-9","Negative pressure wound therapy after severe open fractures: a prospective randomized study. / Stannard J.P. [et al.] // J. Orthop. Trauma. - 2009 - Vol.: 23(8) p.: 552-7","Negative pressure wound therapy for critically ill adults with open abdominal wounds: a systematic review. / Roberts D.J. [et al.] // J. Trauma Acute Care Surg. - 2012 - Vol.: 73(3) p.: 629-39","Prophylactic use of negative pressure wound therapy after cesarean delivery. / Echebiri N.C. [et al.] // Obstet. Gynecol. - 2015 - Vol.: 125(2) p.: 299-307","Cost of care using prophylactic negative pressure wound vacuum on closed laparotomy incisions. / Lewis L.S. [et al.] // GynecolOncol. - 2014 - Vol.: 132(3) p.: 684-9","ost-utility analysis of negative pressure wound therapy in high-risk cesarean section wounds. / Tuffaha H.W. [et al.] // J. Surg. Res. - 2015 - Vol.:195(2) p.: 612-22","Tanner J. Double gloving to reduce surgical cross-infection. / Tanner J, Parkinson H. // Cochrane Database Syst. Rev. - 2009 - Vol.: (4)","Influence of rescrubbing before laparotomy closure on abdominal wound infection after colorectal cancer surgery: results of a multicenter randomized clinical trial. / Ortiz H. [et al.] // Arch Surg. - 2012 - Vol.: 147(7) p.: 614-20","Surgical site infection rates following implementation of a colorectal closure bundle in elective colorectal surgeries. / Ghuman A. [et al.] // Dis. Colon Rectum. - 2015 - Vol.: 58(11) p.: 1078-82","The effect of triclosan-coated sutures in wound healing. A double blind randomised prospectivepilot study. / Deliaert A.E. [et al.] // J. Plast. Reconstr Aesth Surg. - 2009 - Vol.: 62(6) p.: 771-3","ussell A.D. Whither triclosan? / Russell A.D. // J. Antimicrob. Chemother. - 2004 - Vol.: 53(5) p.: 693-5","Molecular basis of triclosan activity. / Levy C.W. [et al.] // Nature. - 1999 - vol.: 398(6726) p.: 383-4","McMurry L.M. Triclosan targets lipid synthesis. / McMurry L.M., Oethinger M., Levy S.B. // Nature. - 1998 - vol.: 394(6693) p.: 531-2. 115.Study of the efficacy of coated Vicryl plus antibacterial suture in an animal model of orthopedic surgery. / Marco F. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). 2007; - Vol.: 8(3) p.: 359-65","In vitro antimicrobial evaluation of coated VICRYL* Plus antibacterial suture (coated polyglactin 910 with triclosan) using zone of inhibition assays. / Rothenburger S. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2002 - Vol.: 3(Suppl. 1) p.: 79-87","Storch M.L., Rothenburger S.J., Jacinto G. Experimental efficacy study of coated VICRYL plus antibacterial suture in guinea pigs challenged with Staphylococcus aureus. / Storch M.L., Rothenburger S.J., Jacinto G. // Surg. Infect. (Larchmt). - 2004 - Vol.: 5(3) p.: 281-8","New anti-infective coatings of surgical sutures based on a combination of antiseptics and fatty acids. / Matl F.D. [et al.] // J. Biomat. Sci. - 2009 Vol.: 20(10) p.: 1439-49","Novel high efficient coatings for anti-microbial surgical sutures using chlorhexidine in fatty acid slow-release carrier systems. / Obermeier A. [et al.] // PloS One. - 2014 - Vol.: 9(7) p.: e101426","Galal I. Impact of using triclosan-antibacterial sutures on incidence of surgical site infection. / Galal I., El-Hindawy K. // Am. J. Surg. - 2011 - Vol.: 202(2) p.: 133-8","Triclosan-coated sutures reduce the incidence of wound infections and the costs after colorectal surgery: a randomized controlled trial. / Nakamura T. [et al.] // Surgery. - 2013 - Vol.: 153(4) p.: 576-83","Triclosan-coated sutures for the reduction of sternal wound infections: economic considerations. / Fleck T. [et al.] // Ann. Thorac. Surg. - 2007 - Vol.: 84(1) p.: 232-6","Prospective randomised comparison of single-dose versus multiple-dose cefuroxime for prophylaxis in coronary artery bypass grafting. / Nooyen S.M. [et al.] // Europ. J. Clin. Microbio.l Infect. Dis. - 1994 - Vol.: 13(12) p.: 1033-7","omparative study of single-dose and 24-hour multiple-dose antibiotic prophylaxis for cardiac surgery. / Tamayo E. [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2008 - Vol.: 136(6) p.: 1522-7","Single-dose versus single-day antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery: a prospective, randomized, double-blind clinical study. / Danda A.K. [et al.] // J. Oral Maxillofac. Surg. - 2010 - Vol.: 68(2) p.: 344-6","Antibiotic prophylaxis for bilateral sagittal split osteotomies: a randomized, double-blind clinical study. / Wahab P.U.A. [et al.] // Int. J. Oral Maxillofac. Surg. - 2013 - Vol.: 42(3) p.: 352-5","Prospective randomized study of efficacy of 1-day versus 3-day antibiotic prophylaxis for preventing surgical site infection after coronary artery bypass graft. / Lin M.H. [et al.] // J. Form Med. Assoc. - 2011 - Vol.: 110(10) p.: 619-26","Antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery: a prospective, randomised clinical trial. / Baqain Z.H. [et al.] // The Br. J. Oral. Maxillofac. Surg. - 2004 - Vol.: 42(6) p.: 506-10","Value of prophylactic postoperative antibiotic therapy after bimaxillary orthognathic surgery: A clinical trial. / Eshghpour M. [et al.] // Iran J. Otorhinolaryngol. - 2014 - Vol.: 26(77) p.: 207-10","Fridrich K.L. Prospective analysis of antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery. / Fridrich K.L., Partnoy B.E., Zeitler D.L. // Int. J. Adult Orthodon. Orthognath. Surg. 1994;9(2):129-31","Dickinson Jennings C. A prospective, randomized controlled trial comparing 3 dressing types following sternotomy. Dickinson Jennings C., Culver Clark R., Baker J.W. Ostomy Wound Manage. - 2015 - Vol.: 61(5) p.: 42-9","Vogt K.C. Moist wound healing compared with standard care of treatment of primary closed vascular surgical wounds: a prospective randomized controlled study. / Vogt K.C., Uhlyarik M., Schroeder T.V. // Wound Repair Regen. - 2007 - Vol.: 15(5) p.: 624-7","ffect of three wound dressings on infection, healing comfort, and cost in patients with sternotomy wounds: a randomized trial. /Wynne R. [et al.] // Chest. - 2004 - Vol.: 125(1) p.: 43-9","Michie D.D. Influence of occlusive and impregnated gauze dressings on incisional healing: a prospective, randomized, controlled study. / Michie D.D., Hugill J.V. // Ann. Plast. Surg. - 1994 - Vol.: 32(1) p.: 57-64","Galandiuk S. Postoperative irrigation-suction drainage after pelvic colonic surgery. A prospective randomized trial. Galandiuk S., Fazio V.W. Dis Colon Rectum. - 1991 - Vol.: 34(3) p.: 223-8","andomized trial of drainage of colorectal anastomosis. / Sagar P.M. [et al.] // Br. J. Surg. - 1993 - Vol.: 80(6) p.: 769-71","erliner S.D., Burson L.C., Lear P.E. Use and a buse of intraperitoneal drains in colon surgery. / Berliner S.D., Burson L.C., Lear P.E. // Arch Surg. -1964 - Vol.: 89 p.: 686-9","The effect of surgical drainage materials oncolonic healing. / Smith S.R. [et al.] // Br. J. Surg. - 1982 - Vol.: 69(3) p.:153-5","Paint-only is equivalent to scrub-and-paint in preoperative preparation of abdominal surgery sites. Ellenhorn J.D. [et al.] // J. Am. Coll. Surg. - 2005; Vol. 201(5) p.:737-41","Effect of pre-operative skin preparation on postoperative wound infection. Shirahatti R.G. [et al.] // J. Postgrad. Med. - 1993; Vol.:39(3) p.:134-6","Segal C.G. Preoperative skin preparation of cardiac patients / Segal C.G., Anderson J.J. // AORN J. - 2002 - Vol.:76 (5) p.:821-8","Rodrigues A.L. Incidence of surgical site infection with pre-operative skin preparation using 10% polyvidone-iodine and 0.5% chlorhexidine-alcohol / Rodrigues A.L., Simoes Mde L. // Rev. Col. Bras. Cir. - 2013 Vol.: 40(6) p.:443-8","Minimizing wound contamination in a ‘clean’ surgery: comparison of chlorhexidine-ethanol and povidone-iodine. Sistla S.C. [et al.] // Chemotherapy. - 2010. - Vol.:56(4) p.:261-7","Comparison of the efficacy of chlorhexidine gluconate versus povidone iodine as preoperative skin preparation for the prevention of surgical site infections in clean-contaminated upper abdominal surgeries. Srinivas A. [et al.] // Surg. Today - 2014. - Vol.:45 p.:1378-84","Paocharoen V. Comparison of surgical wound infection after preoperative skin preparation with 4% chlohexidine and povidone iodine: A prospective randomized trial. Paocharoen V., Mingmalairak C., Apisarnthanarak A. // J. Med. Associ. Thai. - 2009. - Vol.:92(7) p.:898-902","Chlorhexidine-alcohol versus povidone-iodine for surgical-site antisepsis / Darouiche R.O. [et al.] // New Engl. J. Med. - 2010. - Vol.:362 p.:18-26","Efficacy of surgical preparation solutions in lumbar spine surgery / Savage J.W. [et al.] // J. Bone Joint Surg. (Am). - 2012 - Vol.:94 p.: 490-4","A randomized trial comparing skin antiseptic agents at cesarean delivery / Tuuli M.G. [et al.] // New Engl. J. Med. - 2016 - Vol.:374(7) p.: 647-55","Systematic review and cost analysis comparing use of chlorhexidine with use of iodine for preoperative skin antisepsis to prevent surgical site infection / Lee I. [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2010. - Vol.:31(12) p.:1219-29","Guideline for prevention of surgical site infection, 1999. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Mangram A.J. [et al.] // Am. J. Infect. Control. - 1999 - Vol.: 27(2) p.: 97-132; quiz 3-4; discussion 96","Dohmen P.M. Impact of antimicrobial skin sealants on surgical site infections / Dohmen P.M. - Surg. Infect. (Larchmt) - 2014. - Vol.:15(4) p.:368-71","Influence of preoperative skin sealing with cyanoacrylate on microbial contamination of surgical wounds following trauma surgery: a prospective, blinded, controlled observational study. Daeschlein G. [et al.] // Int. J. Infect. Dis. - 2014 - Vol.: 29 p.: 274-8","Microbial sealants do not decrease surgical site infection for clean-contaminated colorectal procedures. / Doorly [et al.] // M. Tech. Coloproctol. - 2015 - Vol.:19(5) p.:281-5","Efficacy of integuseal for surgical skin preparation in children and adolescents undergoing scoliosis correction / Dromzee E. [et al.] // Spine. - 2012 - Vol.:37(21) p.:e1331-5","Bacterial growth and wound infection following saphenous vein harvesting in cardiac surgery: a randomized controlled trial of the impact of microbial skin sealant / Falk-Brynhildsen K. [et al.] // Europ. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2014 - Vol.:33(11) p.:1981-7","Reduction of surgical site infection using a microbial sealant: a randomized trial / Iyer A. [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2011. - Vol.: 142(2) p.: 438-42","Significant reduction in incidence of wound contamination by skin flora through use of microbial sealant / Towfigh S [et al.] // Arch Surg. - 2008 - Vol.: 143(9) p.: 885-91; discussion 91","Cyanoacrylate skin microsealant for preventing surgical site infection after vascular surgery: a discontinued randomized clinical trial / Vierhout B.P. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2014 - Vol.: 15(4) p.: 425-30","A randomized trial of a skin sealant to reduce the risk of incision contamination in cardiac surgery / von Eckardstein A.S. [et al.] // Ann. Thorac. Surg. - 2011 Vol.: 92(2) p.: 632-7","Roy P. Serious adverse events after microbial sealant application in paediatric patients / Roy P., Loubiere A., Vaillant T., Edouard B. // Ann Pharm Fr. - 2014 - Vol.: 72(6) p.: 409-14","Cyanoacrylate microbial sealants for skin preparation prior to surgery / Lipp A. [et al.] // Cochrane Database Syst. Rev. - 2013 Vol: 8:CD008062","WHO guidelines on hand hygiene in health care. Geneva: World Health Organization - 2009 - URL: http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/44102/1/9789241597906_eng.pdf (accessed 24 July 2016)","Clusterrandomized, crossover trial of the efficacy of plain soap and water versus alcohol-based rub for surgical hand preparation in a rural hospital in Kenya. Nthumba P.M. [ et al.] // Br. J. Surg. - 2010 - Vol.: (11) p.:1621-8","Alcohol-based hand-rub versus traditional surgical scrub and the risk of surgical site infection: a randomized controlled equivalent trial / Al-Naami M.Y. [et al.]// EWMA J. - 2009 - Vol.: 9(3) p.:5-10","Weight C.J. Avagard hand antisepsis vs. traditional scrub in 3600 pediatric urologic procedures / Weight C.J., Lee M.C., Palmer J.S// Urology - 2010 - Vol.: 76(1) p.:15-7","Clinical implementation of a scrubless chlorhexidine/ethanol pre-operative surgical handrub / Marchand R. [ et al.] // Can. Oper. Room. Nurs. J. - 2008 - Vol.: 26(2) p.:21-2, 6, 9-2231","Value of hand disinfection by rubbing with alcohol prior to surgery in a tropical setting / Adjoussou S. [et al.] // Med. Trop. - 2009 - Vol.:69(5) p.: 463-6","Mainous M.R. Nutrition and infection / Mainous M.R., Deitch E.A. // Surg Clin North Am. -1994 - Vol.:74(3) p.: 659-76","Culebras J.M. Malnutrition in the twenty-first century: an epidemic affecting surgical outcome. / Culebras J.M. // Surg. Infect (Larchmt) - 2013 Vol.: 14(3) p.: 237-43","Waitzberg D.L., Ravacci G.R., Raslan M. Hospital hyponutrition / Waitzberg D.L., Ravacci G.R., Raslan M. // Nutr Hosp. - 2011 Vol.: 26(2) p.: 254-64","Studley H.O. Percentage of weight loss: a basic indicator of surgical risk in patients with chronic peptic ulcer. 1936. / Studley H.O.// Nutr. Hosp. - 2001 Vol.: 16(4) p.:141-3; discussion 0-1","Nutrition in the surgical patient: immunonutrition / Culebras-Fernandez J.M. [et al.] // Nutr Hosp. - 2001 Vol.: 16(3) p.: 67-77","Fry D.E. Fifty ways to cause surgical site infections. Surg. Infect. / Fry D.E. // Larchmt. - 2011 - Vol.: 12(6) p.:497-500","Di Carlo V. Complications of pancreatic surgery and the role of perioperative nutrition. [et al.] // Dig. Surg. - 1999. - Vol.: 16(4) p.: 320-6","Mazaki T., Ishii Y., Murai I. Immunoenhancing enteral and parenteral nutrition for gastrointestinal surgery: a multiple-treatments metaanalysis. / Mazaki T., Ishii Y., Murai I. // Ann. Surg. - 2015 - Vol.: 261(4) p.: 662-9","The impact of perioperative glutamine-supplemented parenteral nutrition on outcomes of patients undergoing abdominal surgery: a meta-analysis of randomized clinical trials / Yue C. [et al.]// Am. Surg. - 2013. - Vol.: 79(5) p.: 506-13","The role of immunonutrition in gynecologic oncologic surgery / Celik J.B. [et al.] // Europ. J. Gynaecol. Oncol. - 2009 - Vol.: 30(4) p.: 418-21","Reduced infections with perioperative immunonutrition in head and neck cancer: exploratory results of a multicenter, prospective, randomized, doubleblind study /Falewee M.N. [et al.] // Clin. Nutr. - 2014 - Vol.: 33(5) p.: 776-84","Prospective randomized trial of preoperative enteral immunonutrition followed by elective total gastrectomy for gastric cancer / Fujitani K. [et al.] // Br. J. Surg. - 2012 - Vol.: 99(5) p.: 621-9","The immunomodulating enteral nutrition in malnourished surgical patients - a prospective, randomized, double-blind clinical trial / Klek S. [et al.] // Clin. Nutr. - 2011 - Vol.: 30(3) p.: 282-8","Effect of preoperative oral immuneenhancing nutritional supplement on patients at high risk of infection after cardiac surgery: a random- ised placebo-controlled trial. / Tepaske R. [et al.] // Lancet. - 2001 - Vol.: 358(9283) p.: 696-701","Immunoenhanced enteral nutrition formulas in head and neck cancer surgery: a prospective, randomized clinical trial / Casas-Rodera P. [et al.] // Nutr. Hosp. - 2008 - Vol.: 23(2) p.: 105-10","Randomized clinical trial with an enteral arginine-enhanced formula in early postsurgical head and neck cancer patients / de Luis D.A. [et al.] // Europ. J. Clin. Nutr. - 2004 - Vol.: 58(11) p.: 1505-8","High dose of arginine enhanced enteral nutrition in postsurgical head and neck cancer patients. A randomized clinical trial. / De Luis DA. [et al.] // Europ. Rev. Med. Pharmacol. Sci. - 2009 - Vol.: 13(4) p.: 279-83","Effects of branched-chain amino acids-enriched nutrient support for patients undergoing liver resection for hepatocellular carcinoma / Okabayashi T. [et al.]// J. Gastroenterol Hepatol. - 2008 - Vol.: 23(12) p.: 1869-73","Berthold E. Continuation of TNF blockade in patients with inflammatory rheumatic disease. An observational study on surgical site infections in 1,596 elective orthopedic and hand surgery procedures / Berthold E., Geborek P., Gulfe A.// Acta Orthop. - 2013 - Vol.: 84(5) p.: 495-501","Immunosuppressive therapy does not increase operative morbidity in patients with Crohn's disease / Bafford AC [et al.] // J. Clin. Gastroenterol. - 2013 - Vol.:47(6) p.: 491-5","Strategies to prevent surgical site infectionsion acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. - 2014 - 35(6) p.: 605-27","Effects of supplemental oxygen and dexamethasone on surgical site infection: a factorial randomized trial double dagger / Kurz A. [et al.] // Br. J. Anaesth. -2015 - Vol.: 115(3) p.: 434-43","The role of oxygen in wound healing: a review of the literature. / Rodriguez P.G. [et al.] // Dermatol Surg. - 2008 - Vol.: 34(9) p.: 1159-69","Wound hypoxia and acidosis limit neutrophil bacterial killing mechanisms / Allen D.B. [et al.]// Arch Surg. - 1997 - Vol.: 132(9) p.: 991-6","Hays R.C. PO2, pH, and redox potential of experimental abscesses / Hays R.C., Mandell G.L. // Proc. Soc. Exper. Biol. Medic. Soc. - 1974 - vol.: 147(1) p.: 29-30","Improving surgical site infection prevention practices through a multifaceted educational intervention /Owens P. [et al.] // Ir. Med J. - 2015 - Vol.: 108(3) p.: 78-81","Guidelines: Prevention and treatment of surgical site infection: Summary of NICE guidance. / Leaper D. [et al.] // BMJ. - 2008 - Vol.: 337(7677) p.: 1049-51","Strategies to prevent surgical site infections in acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. - 2014 - Vol.: 35(06) p.: 605-27","Increased long-term mortality after a high perioperative inspiratory oxygen fraction during abdominal surgery: follow-up of a randomized clinical trial / Meyhoff C.S [et al.] // Anesth. Analg. - 2012 - Vol.: 115(4) p.: 849-54","Avoidance of nitrous oxidefor patients undergoing major surgery: a randomized controlled trial. / Myles P.S. [et al.] // Anesthesiology. - 2007 - Vol.: 107(2) p.: 221-31","Hall J.E. Textbook of medical physiology. 12th edition. / Hall J.E., Guyton A.C., editors. // London: Elsevier Saunders; - 2011","Sessler D.I. Mild perioperative hypothermia. / Sessler D.I. // New Engl. J. Med. - 1997 - Vol.: 336(24) p.: 1730-7","Sessler D.I. Physiologic responses to mild perianesthetic hypothermia in humans. / Sessler D.I., Rubinstein E.H., Moayeri A. // Anesthesiology. - 1991 - Vol.: 75(4) p.: 594-610","The effects of mild perioperative hypothermia on blood loss and transfusion requirement. / Rajagopalan S. [et al.] // Anesthesiology. - 2008 - Vol.: 108(1) p.: 71-7","Mild hypothermia alters propofol Pharm acokinetics and increases the duration of action of atracurium. / Leslie K. [et al.] // Anesthes Analg. - 1995 - Vol.: 80(5) p.: 1007-14","The effects of local warming on surgical site infection / Whitney J.D. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2015 - Vol.: 16(5) p.: 595-603","Torossian A. Thermal management during anaesthesia and thermoregulation standards for the prevention of inadvertent perioperative hypothermia. / Torossian A. // Best Pract. Res Clin. Anaesthesiol. - 2008 - Vol.: 22(4) p.: 659-68","Kurz A. Perioperative normothermia to reduce the incidence of surgical-wound infection and shorten hospitalization. Study of Wound Infection and Temperature Group. Kurz A., Sessler D.I., Lenhardt R. New Engl. J. Med. - 1996 - Vol.: 334(19) p.: 1209-15","Effects of preoperative warming on the incidence of wound infection after clean surgery: a randomised controlled trial. / Melling A.C. [et al.] // Lancet. - 2001 Vol.: 358(9285) p.: 876-80","Perioperative cost-finding analysis of the routine use of intraoperative forced-air warming during general anesthesia. / Fleisher L.A. [et al.] // Anesthesiology. - 1998 Vol.: 88(5) p.: 1357-64","Mahoney C.B. Maintaining intraoperative normothermia: a metaanalysis of outcomes with costs. / Mahoney C.B., Odom J. // AANA J. - 1999 - Vol.: 67(2) p.: 155-63","Berry D. A clinical evaluation of the cost and time effectiveness of the ASPAN hypothermia guideline. / Berry D., Wick C., Magons P. // J. Perianesthes Nurs. - 2008 - Vol.: 23(1) p.: 24-35","Postoperative hyperglycemia and surgical site infection in general surgery patients /Ata A. [et al.] // Arch. Surg. - 2010 - Vol.: 145(9) p.: 858-64","Kao L.S. Glycemic control and prevention of surgical site infection. / Kao L.S., Phatak U.R. // Surg. Infect. (Larchmt). - 2013 - Vol.: 14(5) p.: 437-44","Perioperative hyperglycemia and risk of adverse events among patients with and without diabetes. /Kotagal M. [et al.] // Ann Surg. - 2015 - Vol.: 261(1) p.: 97-103","Stress hyperglycemia and surgical site infection in stable nondiabetic adults with orthopedic injuries / Richards J.E. [ et al.] // J. Trauma Acute Care Surg. - 2014 Vol.: 76(4) p.: 1070-5","Emam I.A. [et al.] //Our experience of controlling diabetes in the perioperative period of patients who underwent cardiac surgery. Diabetes Res. Clin. Pract. - 2010 - Vol.: 88(3) p.: 242-6","Does continuous insulin therapy reduce postoperative supraventricular tachycardia incidence after coronary artery bypass operations in diabetic patients? / Kirdemir P. [et al.] // J. Cardiothorac. Vasc. Anesth. - 2008 - Vol.: 22(3) p.: 383-7","Intensive versus conventional glycemic control in patients with diabetes during enteral nutrition after gastrectomy / Yuan J. [et al.] // J. Gastrointest. Surg. - 2015 19(8):1553-8","Effects of intravenous fluid restriction on postoperative complications: comparison of two perioperative fluid regimens: a randomized assessor-blinded multicenter trial. / Brandstrup B. [et al.] // Ann. Surg. - 2003 - Vol.: 238(5) p.: 641-8","Supplemental intravenous crystalloid administration does not reduce the risk of surgical wound infection. / Kabon B. [et al.] // Anesth Analg. - 2005 - Vol.: 101(5) p.: 1546-53","Randomised controlled trial assessing the impact of a nurse delivered, flow monitored protocol for optimisation of circulatory status after cardiac surgery / McKendry M. [et al.] // BMJ. 2004 - Vol.: 329(7460) p.: 258","Early goal-directed therapy after major surgery reduces complications and duration of hospital stay. A randomised, controlled trial [ISRCTN38797445]. / Pearse R. [et al.] // Crit Care. - 2005 - Vol.: 9(6) p.: R687-93","Intravenous fluid restriction after major abdominal surgery: a randomized blinded clinical trial. / Vermeulen H. [et al.] // Trials. - 2009 - Vol.: 10 p.: 50","Effect of intraoperative fluid management on outcome after intraabdominal surgery. / Nisanevich V. [et al.] // Anesthesiology. 2005 - Vol.: 103(1) p.:25-32","Ring drape do not protect against surgical site infections in colorectal surgery: a randomised controlled study / Baier P. [et al.] // Int. J. Colorectal. Dis. - 2012 Vol.: 27(9) p.: 1223-8","Multicenter double-blinded randomized controlled trial of standard abdominal wound edge protection with surgical dressings versus coverage with a sterile circular polyethylene drape for prevention of surgical site infections: a CHIRNet trial (BaFO; NCT01181206). /Mihaljevic A.L. [et al.]// Ann Surg. - 2014 - Vol.: 260(5) p.: 730-7; discussion 7-9","Impact of wound edge protection devices on surgical site infection after laparotomy: multicentre randomised controlled trial (ROSSINI Trial). / Pinkney T.D. [et al.] // BMJ. - 2013 - Vol.: 347 p.: f4305","Use of an impervious wound-edge protector to reduce the postoperative wound infection rate / Redmond H.P. [et al.] // Br. J. Surg. - 1994 - Vol.: 81(1811)","ALEXIS O-Ring wound retractor vs conventional wound protection for the prevention of surgical site infections in colorectal resections (1). / Cheng K.P. [et al.] // Colorectal Dis. - 2012 - Vol.: 14(6) p.: e346-51","Barrier wound protection decreases surgical site infection in open elective colorectal surgery: a randomized clinical trial. /Reid K. [et al.] // Dis Colon Rectum. - 2010 - Vol.: 53(10) p.: 1374-80","A prospective randomized study for evaluation of wound retractors in the prevention of incision site infections after cesarean section. / Theodoridis T.D. [et al.] // Clin Exper Obstet Gynecol. - 2011 - Vol.: 38(1) p.:57-9","Efficacy of dilute betadine solution irrigation in the prevention of postoperative infection of spinal surgery. / Cheng M.T. [et al.] // Spine. - 2005 - Vol.: 30(15) p.:1689-93","Can povidoneiodine solution be used safely in a spinal surgery? / Chang F.Y. [et al.] // Europ. Spine J. - 2006 - Vol.: 15(6) p.:1005-14","Rogers D.M. Povidoneiodine wound irrigation and wound sepsis. / Rogers D.M., Blouin G.S., O'Leary J.P. // Surg. Gynecol. Obstet. - 1983 - Vol.: 157(5) p.: 426-30","Combined topical povidone-iodine and systemic antibiotics in postappendicectomy wound sepsis. / Lau W.Y. [et al.] // Br. J. Surg. - 1986 - Vol.: 73(12) p.: 958-60","Intra-operative peritoneal lavage--who does it and why? /Whiteside O.J. [et al.] // Ann. R. Col. Surg. Engl. - 2005 - Vol.: 87(4) p.: 255-8","Measures to prevent surgical site infections: what surgeons (should) do. / Diana M. [et al.] // World J. Surg. - 2011 - Vol.: 35(2) p.: 280-8","Survey of intraoperative povidoneiodine application to prevent surgical site infection in a French region. / Pivot D. [et al.] // J. Hosp. Infection. - 2011 - Vol.: 77(4):363-4","Strategies to prevent surgical site infections in acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2014 - Vol.: 35(6) p.: 605-27","Toxic effects of wound irrigation solutions on cultured tibiae and osteoblasts. / Kaysinger K.K. [et al.] // J. Orthop Trauma. - 1995 - Vol.: 9(4) p.: 303-11","Cellular and bacterial toxicities of topical antimicrobials. / Lineaweaver W. [et al.] // Plast. Reconstr. Surg. - 1985 - Vol.: 75(3) p.: 394-6","lister formation with negative pressure dressings after total knee arthroplasty. /Howell R.D. [et al.] // Curr. Orthop. Pract. - 2011 - Vol.: 22(2) p.: 176-9","Negative pressure wound therapy after severe open fractures: a prospective randomized study. / Stannard J.P. [et al.] // J. Orthop. Trauma. - 2009 - Vol.: 23(8) p.: 552-7","Negative pressure wound therapy for critically ill adults with open abdominal wounds: a systematic review. / Roberts D.J. [et al.] // J. Trauma Acute Care Surg. - 2012 - Vol.: 73(3) p.: 629-39","Prophylactic use of negative pressure wound therapy after cesarean delivery. / Echebiri N.C. [et al.] // Obstet. Gynecol. - 2015 - Vol.: 125(2) p.: 299-307","Cost of care using prophylactic negative pressure wound vacuum on closed laparotomy incisions. / Lewis L.S. [et al.] // GynecolOncol. - 2014 - Vol.: 132(3) p.: 684-9","ost-utility analysis of negative pressure wound therapy in high-risk cesarean section wounds. / Tuffaha H.W. [et al.] // J. Surg. Res. - 2015 - Vol.:195(2) p.: 612-22","Tanner J. Double gloving to reduce surgical cross-infection. / Tanner J, Parkinson H. // Cochrane Database Syst. Rev. - 2009 - Vol.: (4)","Influence of rescrubbing before laparotomy closure on abdominal wound infection after colorectal cancer surgery: results of a multicenter randomized clinical trial. / Ortiz H. [et al.] // Arch Surg. - 2012 - Vol.: 147(7) p.: 614-20","Surgical site infection rates following implementation of a colorectal closure bundle in elective colorectal surgeries. / Ghuman A. [et al.] // Dis. Colon Rectum. - 2015 - Vol.: 58(11) p.: 1078-82","The effect of triclosan-coated sutures in wound healing. A double blind randomised prospectivepilot study. / Deliaert A.E. [et al.] // J. Plast. Reconstr Aesth Surg. - 2009 - Vol.: 62(6) p.: 771-3","ussell A.D. Whither triclosan? / Russell A.D. // J. Antimicrob. Chemother. - 2004 - Vol.: 53(5) p.: 693-5","Molecular basis of triclosan activity. / Levy C.W. [et al.] // Nature. - 1999 - vol.: 398(6726) p.: 383-4","McMurry L.M. Triclosan targets lipid synthesis. / McMurry L.M., Oethinger M., Levy S.B. // Nature. - 1998 - vol.: 394(6693) p.: 531-2. 115.Study of the efficacy of coated Vicryl plus antibacterial suture in an animal model of orthopedic surgery. / Marco F. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). 2007; - Vol.: 8(3) p.: 359-65","In vitro antimicrobial evaluation of coated VICRYL* Plus antibacterial suture (coated polyglactin 910 with triclosan) using zone of inhibition assays. / Rothenburger S. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2002 - Vol.: 3(Suppl. 1) p.: 79-87","Storch M.L., Rothenburger S.J., Jacinto G. Experimental efficacy study of coated VICRYL plus antibacterial suture in guinea pigs challenged with Staphylococcus aureus. / Storch M.L., Rothenburger S.J., Jacinto G. // Surg. Infect. (Larchmt). - 2004 - Vol.: 5(3) p.: 281-8","New anti-infective coatings of surgical sutures based on a combination of antiseptics and fatty acids. / Matl F.D. [et al.] // J. Biomat. Sci. - 2009 Vol.: 20(10) p.: 1439-49","Novel high efficient coatings for anti-microbial surgical sutures using chlorhexidine in fatty acid slow-release carrier systems. / Obermeier A. [et al.] // PloS One. - 2014 - Vol.: 9(7) p.: e101426","Galal I. Impact of using triclosan-antibacterial sutures on incidence of surgical site infection. / Galal I., El-Hindawy K. // Am. J. Surg. - 2011 - Vol.: 202(2) p.: 133-8","Triclosan-coated sutures reduce the incidence of wound infections and the costs after colorectal surgery: a randomized controlled trial. / Nakamura T. [et al.] // Surgery. - 2013 - Vol.: 153(4) p.: 576-83","Triclosan-coated sutures for the reduction of sternal wound infections: economic considerations. / Fleck T. [et al.] // Ann. Thorac. Surg. - 2007 - Vol.: 84(1) p.: 232-6","Prospective randomised comparison of single-dose versus multiple-dose cefuroxime for prophylaxis in coronary artery bypass grafting. / Nooyen S.M. [et al.] // Europ. J. Clin. Microbio.l Infect. Dis. - 1994 - Vol.: 13(12) p.: 1033-7","omparative study of single-dose and 24-hour multiple-dose antibiotic prophylaxis for cardiac surgery. / Tamayo E. [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2008 - Vol.: 136(6) p.: 1522-7","Single-dose versus single-day antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery: a prospective, randomized, double-blind clinical study. / Danda A.K. [et al.] // J. Oral Maxillofac. Surg. - 2010 - Vol.: 68(2) p.: 344-6","Antibiotic prophylaxis for bilateral sagittal split osteotomies: a randomized, double-blind clinical study. / Wahab P.U.A. [et al.] // Int. J. Oral Maxillofac. Surg. - 2013 - Vol.: 42(3) p.: 352-5","Prospective randomized study of efficacy of 1-day versus 3-day antibiotic prophylaxis for preventing surgical site infection after coronary artery bypass graft. / Lin M.H. [et al.] // J. Form Med. Assoc. - 2011 - Vol.: 110(10) p.: 619-26","Antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery: a prospective, randomised clinical trial. / Baqain Z.H. [et al.] // The Br. J. Oral. Maxillofac. Surg. - 2004 - Vol.: 42(6) p.: 506-10","Value of prophylactic postoperative antibiotic therapy after bimaxillary orthognathic surgery: A clinical trial. / Eshghpour M. [et al.] // Iran J. Otorhinolaryngol. - 2014 - Vol.: 26(77) p.: 207-10","Fridrich K.L. Prospective analysis of antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery. / Fridrich K.L., Partnoy B.E., Zeitler D.L. // Int. J. Adult Orthodon. Orthognath. Surg. 1994;9(2):129-31","Dickinson Jennings C. A prospective, randomized controlled trial comparing 3 dressing types following sternotomy. Dickinson Jennings C., Culver Clark R., Baker J.W. Ostomy Wound Manage. - 2015 - Vol.: 61(5) p.: 42-9","Vogt K.C. Moist wound healing compared with standard care of treatment of primary closed vascular surgical wounds: a prospective randomized controlled study. / Vogt K.C., Uhlyarik M., Schroeder T.V. // Wound Repair Regen. - 2007 - Vol.: 15(5) p.: 624-7","ffect of three wound dressings on infection, healing comfort, and cost in patients with sternotomy wounds: a randomized trial. /Wynne R. [et al.] // Chest. - 2004 - Vol.: 125(1) p.: 43-9","Michie D.D. Influence of occlusive and impregnated gauze dressings on incisional healing: a prospective, randomized, controlled study. / Michie D.D., Hugill J.V. // Ann. Plast. Surg. - 1994 - Vol.: 32(1) p.: 57-64","Galandiuk S. Postoperative irrigation-suction drainage after pelvic colonic surgery. A prospective randomized trial. Galandiuk S., Fazio V.W. Dis Colon Rectum. - 1991 - Vol.: 34(3) p.: 223-8","andomized trial of drainage of colorectal anastomosis. / Sagar P.M. [et al.] // Br. J. Surg. - 1993 - Vol.: 80(6) p.: 769-71","erliner S.D., Burson L.C., Lear P.E. Use and a buse of intraperitoneal drains in colon surgery. / Berliner S.D., Burson L.C., Lear P.E. // Arch Surg. -1964 - Vol.: 89 p.: 686-9","The effect of surgical drainage materials oncolonic healing. / Smith S.R. [et al.] // Br. J. Surg. - 1982 - Vol.: 69(3) p.:153-5"],"dc.citation.ru":["Paint-only is equivalent to scrub-and-paint in preoperative preparation of abdominal surgery sites. Ellenhorn J.D. [et al.] // J. Am. Coll. Surg. - 2005; Vol. 201(5) p.:737-41","Effect of pre-operative skin preparation on postoperative wound infection. Shirahatti R.G. [et al.] // J. Postgrad. Med. - 1993; Vol.:39(3) p.:134-6","Segal C.G. Preoperative skin preparation of cardiac patients / Segal C.G., Anderson J.J. // AORN J. - 2002 - Vol.:76 (5) p.:821-8","Rodrigues A.L. Incidence of surgical site infection with pre-operative skin preparation using 10% polyvidone-iodine and 0.5% chlorhexidine-alcohol / Rodrigues A.L., Simoes Mde L. // Rev. Col. Bras. Cir. - 2013 Vol.: 40(6) p.:443-8","Minimizing wound contamination in a ‘clean’ surgery: comparison of chlorhexidine-ethanol and povidone-iodine. Sistla S.C. [et al.] // Chemotherapy. - 2010. - Vol.:56(4) p.:261-7","Comparison of the efficacy of chlorhexidine gluconate versus povidone iodine as preoperative skin preparation for the prevention of surgical site infections in clean-contaminated upper abdominal surgeries. Srinivas A. [et al.] // Surg. Today - 2014. - Vol.:45 p.:1378-84","Paocharoen V. Comparison of surgical wound infection after preoperative skin preparation with 4% chlohexidine and povidone iodine: A prospective randomized trial. Paocharoen V., Mingmalairak C., Apisarnthanarak A. // J. Med. Associ. Thai. - 2009. - Vol.:92(7) p.:898-902","Chlorhexidine-alcohol versus povidone-iodine for surgical-site antisepsis / Darouiche R.O. [et al.] // New Engl. J. Med. - 2010. - Vol.:362 p.:18-26","Efficacy of surgical preparation solutions in lumbar spine surgery / Savage J.W. [et al.] // J. Bone Joint Surg. (Am). - 2012 - Vol.:94 p.: 490-4","A randomized trial comparing skin antiseptic agents at cesarean delivery / Tuuli M.G. [et al.] // New Engl. J. Med. - 2016 - Vol.:374(7) p.: 647-55","Systematic review and cost analysis comparing use of chlorhexidine with use of iodine for preoperative skin antisepsis to prevent surgical site infection / Lee I. [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2010. - Vol.:31(12) p.:1219-29","Guideline for prevention of surgical site infection, 1999. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Mangram A.J. [et al.] // Am. J. Infect. Control. - 1999 - Vol.: 27(2) p.: 97-132; quiz 3-4; discussion 96","Dohmen P.M. Impact of antimicrobial skin sealants on surgical site infections / Dohmen P.M. - Surg. Infect. (Larchmt) - 2014. - Vol.:15(4) p.:368-71","Influence of preoperative skin sealing with cyanoacrylate on microbial contamination of surgical wounds following trauma surgery: a prospective, blinded, controlled observational study. Daeschlein G. [et al.] // Int. J. Infect. Dis. - 2014 - Vol.: 29 p.: 274-8","Microbial sealants do not decrease surgical site infection for clean-contaminated colorectal procedures. / Doorly [et al.] // M. Tech. Coloproctol. - 2015 - Vol.:19(5) p.:281-5","Efficacy of integuseal for surgical skin preparation in children and adolescents undergoing scoliosis correction / Dromzee E. [et al.] // Spine. - 2012 - Vol.:37(21) p.:e1331-5","Bacterial growth and wound infection following saphenous vein harvesting in cardiac surgery: a randomized controlled trial of the impact of microbial skin sealant / Falk-Brynhildsen K. [et al.] // Europ. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2014 - Vol.:33(11) p.:1981-7","Reduction of surgical site infection using a microbial sealant: a randomized trial / Iyer A. [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2011. - Vol.: 142(2) p.: 438-42","Significant reduction in incidence of wound contamination by skin flora through use of microbial sealant / Towfigh S [et al.] // Arch Surg. - 2008 - Vol.: 143(9) p.: 885-91; discussion 91","Cyanoacrylate skin microsealant for preventing surgical site infection after vascular surgery: a discontinued randomized clinical trial / Vierhout B.P. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2014 - Vol.: 15(4) p.: 425-30","A randomized trial of a skin sealant to reduce the risk of incision contamination in cardiac surgery / von Eckardstein A.S. [et al.] // Ann. Thorac. Surg. - 2011 Vol.: 92(2) p.: 632-7","Roy P. Serious adverse events after microbial sealant application in paediatric patients / Roy P., Loubiere A., Vaillant T., Edouard B. // Ann Pharm Fr. - 2014 - Vol.: 72(6) p.: 409-14","Cyanoacrylate microbial sealants for skin preparation prior to surgery / Lipp A. [et al.] // Cochrane Database Syst. Rev. - 2013 Vol: 8:CD008062","WHO guidelines on hand hygiene in health care. Geneva: World Health Organization - 2009 - URL: http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/44102/1/9789241597906_eng.pdf (accessed 24 July 2016)","Clusterrandomized, crossover trial of the efficacy of plain soap and water versus alcohol-based rub for surgical hand preparation in a rural hospital in Kenya. Nthumba P.M. [ et al.] // Br. J. Surg. - 2010 - Vol.: (11) p.:1621-8","Alcohol-based hand-rub versus traditional surgical scrub and the risk of surgical site infection: a randomized controlled equivalent trial / Al-Naami M.Y. [et al.]// EWMA J. - 2009 - Vol.: 9(3) p.:5-10","Weight C.J. Avagard hand antisepsis vs. traditional scrub in 3600 pediatric urologic procedures / Weight C.J., Lee M.C., Palmer J.S// Urology - 2010 - Vol.: 76(1) p.:15-7","Clinical implementation of a scrubless chlorhexidine/ethanol pre-operative surgical handrub / Marchand R. [ et al.] // Can. Oper. Room. Nurs. J. - 2008 - Vol.: 26(2) p.:21-2, 6, 9-2231","Value of hand disinfection by rubbing with alcohol prior to surgery in a tropical setting / Adjoussou S. [et al.] // Med. Trop. - 2009 - Vol.:69(5) p.: 463-6","Mainous M.R. Nutrition and infection / Mainous M.R., Deitch E.A. // Surg Clin North Am. -1994 - Vol.:74(3) p.: 659-76","Culebras J.M. Malnutrition in the twenty-first century: an epidemic affecting surgical outcome. / Culebras J.M. // Surg. Infect (Larchmt) - 2013 Vol.: 14(3) p.: 237-43","Waitzberg D.L., Ravacci G.R., Raslan M. Hospital hyponutrition / Waitzberg D.L., Ravacci G.R., Raslan M. // Nutr Hosp. - 2011 Vol.: 26(2) p.: 254-64","Studley H.O. Percentage of weight loss: a basic indicator of surgical risk in patients with chronic peptic ulcer. 1936. / Studley H.O.// Nutr. Hosp. - 2001 Vol.: 16(4) p.:141-3; discussion 0-1","Nutrition in the surgical patient: immunonutrition / Culebras-Fernandez J.M. [et al.] // Nutr Hosp. - 2001 Vol.: 16(3) p.: 67-77","Fry D.E. Fifty ways to cause surgical site infections. Surg. Infect. / Fry D.E. // Larchmt. - 2011 - Vol.: 12(6) p.:497-500","Di Carlo V. Complications of pancreatic surgery and the role of perioperative nutrition. [et al.] // Dig. Surg. - 1999. - Vol.: 16(4) p.: 320-6","Mazaki T., Ishii Y., Murai I. Immunoenhancing enteral and parenteral nutrition for gastrointestinal surgery: a multiple-treatments metaanalysis. / Mazaki T., Ishii Y., Murai I. // Ann. Surg. - 2015 - Vol.: 261(4) p.: 662-9","The impact of perioperative glutamine-supplemented parenteral nutrition on outcomes of patients undergoing abdominal surgery: a meta-analysis of randomized clinical trials / Yue C. [et al.]// Am. Surg. - 2013. - Vol.: 79(5) p.: 506-13","The role of immunonutrition in gynecologic oncologic surgery / Celik J.B. [et al.] // Europ. J. Gynaecol. Oncol. - 2009 - Vol.: 30(4) p.: 418-21","Reduced infections with perioperative immunonutrition in head and neck cancer: exploratory results of a multicenter, prospective, randomized, doubleblind study /Falewee M.N. [et al.] // Clin. Nutr. - 2014 - Vol.: 33(5) p.: 776-84","Prospective randomized trial of preoperative enteral immunonutrition followed by elective total gastrectomy for gastric cancer / Fujitani K. [et al.] // Br. J. Surg. - 2012 - Vol.: 99(5) p.: 621-9","The immunomodulating enteral nutrition in malnourished surgical patients - a prospective, randomized, double-blind clinical trial / Klek S. [et al.] // Clin. Nutr. - 2011 - Vol.: 30(3) p.: 282-8","Effect of preoperative oral immuneenhancing nutritional supplement on patients at high risk of infection after cardiac surgery: a random- ised placebo-controlled trial. / Tepaske R. [et al.] // Lancet. - 2001 - Vol.: 358(9283) p.: 696-701","Immunoenhanced enteral nutrition formulas in head and neck cancer surgery: a prospective, randomized clinical trial / Casas-Rodera P. [et al.] // Nutr. Hosp. - 2008 - Vol.: 23(2) p.: 105-10","Randomized clinical trial with an enteral arginine-enhanced formula in early postsurgical head and neck cancer patients / de Luis D.A. [et al.] // Europ. J. Clin. Nutr. - 2004 - Vol.: 58(11) p.: 1505-8","High dose of arginine enhanced enteral nutrition in postsurgical head and neck cancer patients. A randomized clinical trial. / De Luis DA. [et al.] // Europ. Rev. Med. Pharmacol. Sci. - 2009 - Vol.: 13(4) p.: 279-83","Effects of branched-chain amino acids-enriched nutrient support for patients undergoing liver resection for hepatocellular carcinoma / Okabayashi T. [et al.]// J. Gastroenterol Hepatol. - 2008 - Vol.: 23(12) p.: 1869-73","Berthold E. Continuation of TNF blockade in patients with inflammatory rheumatic disease. An observational study on surgical site infections in 1,596 elective orthopedic and hand surgery procedures / Berthold E., Geborek P., Gulfe A.// Acta Orthop. - 2013 - Vol.: 84(5) p.: 495-501","Immunosuppressive therapy does not increase operative morbidity in patients with Crohn's disease / Bafford AC [et al.] // J. Clin. Gastroenterol. - 2013 - Vol.:47(6) p.: 491-5","Strategies to prevent surgical site infectionsion acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. - 2014 - 35(6) p.: 605-27","Effects of supplemental oxygen and dexamethasone on surgical site infection: a factorial randomized trial double dagger / Kurz A. [et al.] // Br. J. Anaesth. -2015 - Vol.: 115(3) p.: 434-43","The role of oxygen in wound healing: a review of the literature. / Rodriguez P.G. [et al.] // Dermatol Surg. - 2008 - Vol.: 34(9) p.: 1159-69","Wound hypoxia and acidosis limit neutrophil bacterial killing mechanisms / Allen D.B. [et al.]// Arch Surg. - 1997 - Vol.: 132(9) p.: 991-6","Hays R.C. PO2, pH, and redox potential of experimental abscesses / Hays R.C., Mandell G.L. // Proc. Soc. Exper. Biol. Medic. Soc. - 1974 - vol.: 147(1) p.: 29-30","Improving surgical site infection prevention practices through a multifaceted educational intervention /Owens P. [et al.] // Ir. Med J. - 2015 - Vol.: 108(3) p.: 78-81","Guidelines: Prevention and treatment of surgical site infection: Summary of NICE guidance. / Leaper D. [et al.] // BMJ. - 2008 - Vol.: 337(7677) p.: 1049-51","Strategies to prevent surgical site infections in acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. - 2014 - Vol.: 35(06) p.: 605-27","Increased long-term mortality after a high perioperative inspiratory oxygen fraction during abdominal surgery: follow-up of a randomized clinical trial / Meyhoff C.S [et al.] // Anesth. Analg. - 2012 - Vol.: 115(4) p.: 849-54","Avoidance of nitrous oxidefor patients undergoing major surgery: a randomized controlled trial. / Myles P.S. [et al.] // Anesthesiology. - 2007 - Vol.: 107(2) p.: 221-31","Hall J.E. Textbook of medical physiology. 12th edition. / Hall J.E., Guyton A.C., editors. // London: Elsevier Saunders; - 2011","Sessler D.I. Mild perioperative hypothermia. / Sessler D.I. // New Engl. J. Med. - 1997 - Vol.: 336(24) p.: 1730-7","Sessler D.I. Physiologic responses to mild perianesthetic hypothermia in humans. / Sessler D.I., Rubinstein E.H., Moayeri A. // Anesthesiology. - 1991 - Vol.: 75(4) p.: 594-610","The effects of mild perioperative hypothermia on blood loss and transfusion requirement. / Rajagopalan S. [et al.] // Anesthesiology. - 2008 - Vol.: 108(1) p.: 71-7","Mild hypothermia alters propofol Pharm acokinetics and increases the duration of action of atracurium. / Leslie K. [et al.] // Anesthes Analg. - 1995 - Vol.: 80(5) p.: 1007-14","The effects of local warming on surgical site infection / Whitney J.D. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2015 - Vol.: 16(5) p.: 595-603","Torossian A. Thermal management during anaesthesia and thermoregulation standards for the prevention of inadvertent perioperative hypothermia. / Torossian A. // Best Pract. Res Clin. Anaesthesiol. - 2008 - Vol.: 22(4) p.: 659-68","Kurz A. Perioperative normothermia to reduce the incidence of surgical-wound infection and shorten hospitalization. Study of Wound Infection and Temperature Group. Kurz A., Sessler D.I., Lenhardt R. New Engl. J. Med. - 1996 - Vol.: 334(19) p.: 1209-15","Effects of preoperative warming on the incidence of wound infection after clean surgery: a randomised controlled trial. / Melling A.C. [et al.] // Lancet. - 2001 Vol.: 358(9285) p.: 876-80","Perioperative cost-finding analysis of the routine use of intraoperative forced-air warming during general anesthesia. / Fleisher L.A. [et al.] // Anesthesiology. - 1998 Vol.: 88(5) p.: 1357-64","Mahoney C.B. Maintaining intraoperative normothermia: a metaanalysis of outcomes with costs. / Mahoney C.B., Odom J. // AANA J. - 1999 - Vol.: 67(2) p.: 155-63","Berry D. A clinical evaluation of the cost and time effectiveness of the ASPAN hypothermia guideline. / Berry D., Wick C., Magons P. // J. Perianesthes Nurs. - 2008 - Vol.: 23(1) p.: 24-35","Postoperative hyperglycemia and surgical site infection in general surgery patients /Ata A. [et al.] // Arch. Surg. - 2010 - Vol.: 145(9) p.: 858-64","Kao L.S. Glycemic control and prevention of surgical site infection. / Kao L.S., Phatak U.R. // Surg. Infect. (Larchmt). - 2013 - Vol.: 14(5) p.: 437-44","Perioperative hyperglycemia and risk of adverse events among patients with and without diabetes. /Kotagal M. [et al.] // Ann Surg. - 2015 - Vol.: 261(1) p.: 97-103","Stress hyperglycemia and surgical site infection in stable nondiabetic adults with orthopedic injuries / Richards J.E. [ et al.] // J. Trauma Acute Care Surg. - 2014 Vol.: 76(4) p.: 1070-5","Emam I.A. [et al.] //Our experience of controlling diabetes in the perioperative period of patients who underwent cardiac surgery. Diabetes Res. Clin. Pract. - 2010 - Vol.: 88(3) p.: 242-6","Does continuous insulin therapy reduce postoperative supraventricular tachycardia incidence after coronary artery bypass operations in diabetic patients? / Kirdemir P. [et al.] // J. Cardiothorac. Vasc. Anesth. - 2008 - Vol.: 22(3) p.: 383-7","Intensive versus conventional glycemic control in patients with diabetes during enteral nutrition after gastrectomy / Yuan J. [et al.] // J. Gastrointest. Surg. - 2015 19(8):1553-8","Effects of intravenous fluid restriction on postoperative complications: comparison of two perioperative fluid regimens: a randomized assessor-blinded multicenter trial. / Brandstrup B. [et al.] // Ann. Surg. - 2003 - Vol.: 238(5) p.: 641-8","Supplemental intravenous crystalloid administration does not reduce the risk of surgical wound infection. / Kabon B. [et al.] // Anesth Analg. - 2005 - Vol.: 101(5) p.: 1546-53","Randomised controlled trial assessing the impact of a nurse delivered, flow monitored protocol for optimisation of circulatory status after cardiac surgery / McKendry M. [et al.] // BMJ. 2004 - Vol.: 329(7460) p.: 258","Early goal-directed therapy after major surgery reduces complications and duration of hospital stay. A randomised, controlled trial [ISRCTN38797445]. / Pearse R. [et al.] // Crit Care. - 2005 - Vol.: 9(6) p.: R687-93","Intravenous fluid restriction after major abdominal surgery: a randomized blinded clinical trial. / Vermeulen H. [et al.] // Trials. - 2009 - Vol.: 10 p.: 50","Effect of intraoperative fluid management on outcome after intraabdominal surgery. / Nisanevich V. [et al.] // Anesthesiology. 2005 - Vol.: 103(1) p.:25-32","Ring drape do not protect against surgical site infections in colorectal surgery: a randomised controlled study / Baier P. [et al.] // Int. J. Colorectal. Dis. - 2012 Vol.: 27(9) p.: 1223-8","Multicenter double-blinded randomized controlled trial of standard abdominal wound edge protection with surgical dressings versus coverage with a sterile circular polyethylene drape for prevention of surgical site infections: a CHIRNet trial (BaFO; NCT01181206). /Mihaljevic A.L. [et al.]// Ann Surg. - 2014 - Vol.: 260(5) p.: 730-7; discussion 7-9","Impact of wound edge protection devices on surgical site infection after laparotomy: multicentre randomised controlled trial (ROSSINI Trial). / Pinkney T.D. [et al.] // BMJ. - 2013 - Vol.: 347 p.: f4305","Use of an impervious wound-edge protector to reduce the postoperative wound infection rate / Redmond H.P. [et al.] // Br. J. Surg. - 1994 - Vol.: 81(1811)","ALEXIS O-Ring wound retractor vs conventional wound protection for the prevention of surgical site infections in colorectal resections (1). / Cheng K.P. [et al.] // Colorectal Dis. - 2012 - Vol.: 14(6) p.: e346-51","Barrier wound protection decreases surgical site infection in open elective colorectal surgery: a randomized clinical trial. /Reid K. [et al.] // Dis Colon Rectum. - 2010 - Vol.: 53(10) p.: 1374-80","A prospective randomized study for evaluation of wound retractors in the prevention of incision site infections after cesarean section. / Theodoridis T.D. [et al.] // Clin Exper Obstet Gynecol. - 2011 - Vol.: 38(1) p.:57-9","Efficacy of dilute betadine solution irrigation in the prevention of postoperative infection of spinal surgery. / Cheng M.T. [et al.] // Spine. - 2005 - Vol.: 30(15) p.:1689-93","Can povidoneiodine solution be used safely in a spinal surgery? / Chang F.Y. [et al.] // Europ. Spine J. - 2006 - Vol.: 15(6) p.:1005-14","Rogers D.M. Povidoneiodine wound irrigation and wound sepsis. / Rogers D.M., Blouin G.S., O'Leary J.P. // Surg. Gynecol. Obstet. - 1983 - Vol.: 157(5) p.: 426-30","Combined topical povidone-iodine and systemic antibiotics in postappendicectomy wound sepsis. / Lau W.Y. [et al.] // Br. J. Surg. - 1986 - Vol.: 73(12) p.: 958-60","Intra-operative peritoneal lavage--who does it and why? /Whiteside O.J. [et al.] // Ann. R. Col. Surg. Engl. - 2005 - Vol.: 87(4) p.: 255-8","Measures to prevent surgical site infections: what surgeons (should) do. / Diana M. [et al.] // World J. Surg. - 2011 - Vol.: 35(2) p.: 280-8","Survey of intraoperative povidoneiodine application to prevent surgical site infection in a French region. / Pivot D. [et al.] // J. Hosp. Infection. - 2011 - Vol.: 77(4):363-4","Strategies to prevent surgical site infections in acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2014 - Vol.: 35(6) p.: 605-27","Toxic effects of wound irrigation solutions on cultured tibiae and osteoblasts. / Kaysinger K.K. [et al.] // J. Orthop Trauma. - 1995 - Vol.: 9(4) p.: 303-11","Cellular and bacterial toxicities of topical antimicrobials. / Lineaweaver W. [et al.] // Plast. Reconstr. Surg. - 1985 - Vol.: 75(3) p.: 394-6","lister formation with negative pressure dressings after total knee arthroplasty. /Howell R.D. [et al.] // Curr. Orthop. Pract. - 2011 - Vol.: 22(2) p.: 176-9","Negative pressure wound therapy after severe open fractures: a prospective randomized study. / Stannard J.P. [et al.] // J. Orthop. Trauma. - 2009 - Vol.: 23(8) p.: 552-7","Negative pressure wound therapy for critically ill adults with open abdominal wounds: a systematic review. / Roberts D.J. [et al.] // J. Trauma Acute Care Surg. - 2012 - Vol.: 73(3) p.: 629-39","Prophylactic use of negative pressure wound therapy after cesarean delivery. / Echebiri N.C. [et al.] // Obstet. Gynecol. - 2015 - Vol.: 125(2) p.: 299-307","Cost of care using prophylactic negative pressure wound vacuum on closed laparotomy incisions. / Lewis L.S. [et al.] // GynecolOncol. - 2014 - Vol.: 132(3) p.: 684-9","ost-utility analysis of negative pressure wound therapy in high-risk cesarean section wounds. / Tuffaha H.W. [et al.] // J. Surg. Res. - 2015 - Vol.:195(2) p.: 612-22","Tanner J. Double gloving to reduce surgical cross-infection. / Tanner J, Parkinson H. // Cochrane Database Syst. Rev. - 2009 - Vol.: (4)","Influence of rescrubbing before laparotomy closure on abdominal wound infection after colorectal cancer surgery: results of a multicenter randomized clinical trial. / Ortiz H. [et al.] // Arch Surg. - 2012 - Vol.: 147(7) p.: 614-20","Surgical site infection rates following implementation of a colorectal closure bundle in elective colorectal surgeries. / Ghuman A. [et al.] // Dis. Colon Rectum. - 2015 - Vol.: 58(11) p.: 1078-82","The effect of triclosan-coated sutures in wound healing. A double blind randomised prospectivepilot study. / Deliaert A.E. [et al.] // J. Plast. Reconstr Aesth Surg. - 2009 - Vol.: 62(6) p.: 771-3","ussell A.D. Whither triclosan? / Russell A.D. // J. Antimicrob. Chemother. - 2004 - Vol.: 53(5) p.: 693-5","Molecular basis of triclosan activity. / Levy C.W. [et al.] // Nature. - 1999 - vol.: 398(6726) p.: 383-4","McMurry L.M. Triclosan targets lipid synthesis. / McMurry L.M., Oethinger M., Levy S.B. // Nature. - 1998 - vol.: 394(6693) p.: 531-2. 115.Study of the efficacy of coated Vicryl plus antibacterial suture in an animal model of orthopedic surgery. / Marco F. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). 2007; - Vol.: 8(3) p.: 359-65","In vitro antimicrobial evaluation of coated VICRYL* Plus antibacterial suture (coated polyglactin 910 with triclosan) using zone of inhibition assays. / Rothenburger S. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2002 - Vol.: 3(Suppl. 1) p.: 79-87","Storch M.L., Rothenburger S.J., Jacinto G. Experimental efficacy study of coated VICRYL plus antibacterial suture in guinea pigs challenged with Staphylococcus aureus. / Storch M.L., Rothenburger S.J., Jacinto G. // Surg. Infect. (Larchmt). - 2004 - Vol.: 5(3) p.: 281-8","New anti-infective coatings of surgical sutures based on a combination of antiseptics and fatty acids. / Matl F.D. [et al.] // J. Biomat. Sci. - 2009 Vol.: 20(10) p.: 1439-49","Novel high efficient coatings for anti-microbial surgical sutures using chlorhexidine in fatty acid slow-release carrier systems. / Obermeier A. [et al.] // PloS One. - 2014 - Vol.: 9(7) p.: e101426","Galal I. Impact of using triclosan-antibacterial sutures on incidence of surgical site infection. / Galal I., El-Hindawy K. // Am. J. Surg. - 2011 - Vol.: 202(2) p.: 133-8","Triclosan-coated sutures reduce the incidence of wound infections and the costs after colorectal surgery: a randomized controlled trial. / Nakamura T. [et al.] // Surgery. - 2013 - Vol.: 153(4) p.: 576-83","Triclosan-coated sutures for the reduction of sternal wound infections: economic considerations. / Fleck T. [et al.] // Ann. Thorac. Surg. - 2007 - Vol.: 84(1) p.: 232-6","Prospective randomised comparison of single-dose versus multiple-dose cefuroxime for prophylaxis in coronary artery bypass grafting. / Nooyen S.M. [et al.] // Europ. J. Clin. Microbio.l Infect. Dis. - 1994 - Vol.: 13(12) p.: 1033-7","omparative study of single-dose and 24-hour multiple-dose antibiotic prophylaxis for cardiac surgery. / Tamayo E. [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2008 - Vol.: 136(6) p.: 1522-7","Single-dose versus single-day antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery: a prospective, randomized, double-blind clinical study. / Danda A.K. [et al.] // J. Oral Maxillofac. Surg. - 2010 - Vol.: 68(2) p.: 344-6","Antibiotic prophylaxis for bilateral sagittal split osteotomies: a randomized, double-blind clinical study. / Wahab P.U.A. [et al.] // Int. J. Oral Maxillofac. Surg. - 2013 - Vol.: 42(3) p.: 352-5","Prospective randomized study of efficacy of 1-day versus 3-day antibiotic prophylaxis for preventing surgical site infection after coronary artery bypass graft. / Lin M.H. [et al.] // J. Form Med. Assoc. - 2011 - Vol.: 110(10) p.: 619-26","Antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery: a prospective, randomised clinical trial. / Baqain Z.H. [et al.] // The Br. J. Oral. Maxillofac. Surg. - 2004 - Vol.: 42(6) p.: 506-10","Value of prophylactic postoperative antibiotic therapy after bimaxillary orthognathic surgery: A clinical trial. / Eshghpour M. [et al.] // Iran J. Otorhinolaryngol. - 2014 - Vol.: 26(77) p.: 207-10","Fridrich K.L. Prospective analysis of antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery. / Fridrich K.L., Partnoy B.E., Zeitler D.L. // Int. J. Adult Orthodon. Orthognath. Surg. 1994;9(2):129-31","Dickinson Jennings C. A prospective, randomized controlled trial comparing 3 dressing types following sternotomy. Dickinson Jennings C., Culver Clark R., Baker J.W. Ostomy Wound Manage. - 2015 - Vol.: 61(5) p.: 42-9","Vogt K.C. Moist wound healing compared with standard care of treatment of primary closed vascular surgical wounds: a prospective randomized controlled study. / Vogt K.C., Uhlyarik M., Schroeder T.V. // Wound Repair Regen. - 2007 - Vol.: 15(5) p.: 624-7","ffect of three wound dressings on infection, healing comfort, and cost in patients with sternotomy wounds: a randomized trial. /Wynne R. [et al.] // Chest. - 2004 - Vol.: 125(1) p.: 43-9","Michie D.D. Influence of occlusive and impregnated gauze dressings on incisional healing: a prospective, randomized, controlled study. / Michie D.D., Hugill J.V. // Ann. Plast. Surg. - 1994 - Vol.: 32(1) p.: 57-64","Galandiuk S. Postoperative irrigation-suction drainage after pelvic colonic surgery. A prospective randomized trial. Galandiuk S., Fazio V.W. Dis Colon Rectum. - 1991 - Vol.: 34(3) p.: 223-8","andomized trial of drainage of colorectal anastomosis. / Sagar P.M. [et al.] // Br. J. Surg. - 1993 - Vol.: 80(6) p.: 769-71","erliner S.D., Burson L.C., Lear P.E. Use and a buse of intraperitoneal drains in colon surgery. / Berliner S.D., Burson L.C., Lear P.E. // Arch Surg. -1964 - Vol.: 89 p.: 686-9","The effect of surgical drainage materials oncolonic healing. / Smith S.R. [et al.] // Br. J. Surg. - 1982 - Vol.: 69(3) p.:153-5"],"dc.citation.en":["Paint-only is equivalent to scrub-and-paint in preoperative preparation of abdominal surgery sites. Ellenhorn J.D. [et al.] // J. Am. Coll. Surg. - 2005; Vol. 201(5) p.:737-41","Effect of pre-operative skin preparation on postoperative wound infection. Shirahatti R.G. [et al.] // J. Postgrad. Med. - 1993; Vol.:39(3) p.:134-6","Segal C.G. Preoperative skin preparation of cardiac patients / Segal C.G., Anderson J.J. // AORN J. - 2002 - Vol.:76 (5) p.:821-8","Rodrigues A.L. Incidence of surgical site infection with pre-operative skin preparation using 10% polyvidone-iodine and 0.5% chlorhexidine-alcohol / Rodrigues A.L., Simoes Mde L. // Rev. Col. Bras. Cir. - 2013 Vol.: 40(6) p.:443-8","Minimizing wound contamination in a ‘clean’ surgery: comparison of chlorhexidine-ethanol and povidone-iodine. Sistla S.C. [et al.] // Chemotherapy. - 2010. - Vol.:56(4) p.:261-7","Comparison of the efficacy of chlorhexidine gluconate versus povidone iodine as preoperative skin preparation for the prevention of surgical site infections in clean-contaminated upper abdominal surgeries. Srinivas A. [et al.] // Surg. Today - 2014. - Vol.:45 p.:1378-84","Paocharoen V. Comparison of surgical wound infection after preoperative skin preparation with 4% chlohexidine and povidone iodine: A prospective randomized trial. Paocharoen V., Mingmalairak C., Apisarnthanarak A. // J. Med. Associ. Thai. - 2009. - Vol.:92(7) p.:898-902","Chlorhexidine-alcohol versus povidone-iodine for surgical-site antisepsis / Darouiche R.O. [et al.] // New Engl. J. Med. - 2010. - Vol.:362 p.:18-26","Efficacy of surgical preparation solutions in lumbar spine surgery / Savage J.W. [et al.] // J. Bone Joint Surg. (Am). - 2012 - Vol.:94 p.: 490-4","A randomized trial comparing skin antiseptic agents at cesarean delivery / Tuuli M.G. [et al.] // New Engl. J. Med. - 2016 - Vol.:374(7) p.: 647-55","Systematic review and cost analysis comparing use of chlorhexidine with use of iodine for preoperative skin antisepsis to prevent surgical site infection / Lee I. [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2010. - Vol.:31(12) p.:1219-29","Guideline for prevention of surgical site infection, 1999. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Mangram A.J. [et al.] // Am. J. Infect. Control. - 1999 - Vol.: 27(2) p.: 97-132; quiz 3-4; discussion 96","Dohmen P.M. Impact of antimicrobial skin sealants on surgical site infections / Dohmen P.M. - Surg. Infect. (Larchmt) - 2014. - Vol.:15(4) p.:368-71","Influence of preoperative skin sealing with cyanoacrylate on microbial contamination of surgical wounds following trauma surgery: a prospective, blinded, controlled observational study. Daeschlein G. [et al.] // Int. J. Infect. Dis. - 2014 - Vol.: 29 p.: 274-8","Microbial sealants do not decrease surgical site infection for clean-contaminated colorectal procedures. / Doorly [et al.] // M. Tech. Coloproctol. - 2015 - Vol.:19(5) p.:281-5","Efficacy of integuseal for surgical skin preparation in children and adolescents undergoing scoliosis correction / Dromzee E. [et al.] // Spine. - 2012 - Vol.:37(21) p.:e1331-5","Bacterial growth and wound infection following saphenous vein harvesting in cardiac surgery: a randomized controlled trial of the impact of microbial skin sealant / Falk-Brynhildsen K. [et al.] // Europ. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2014 - Vol.:33(11) p.:1981-7","Reduction of surgical site infection using a microbial sealant: a randomized trial / Iyer A. [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2011. - Vol.: 142(2) p.: 438-42","Significant reduction in incidence of wound contamination by skin flora through use of microbial sealant / Towfigh S [et al.] // Arch Surg. - 2008 - Vol.: 143(9) p.: 885-91; discussion 91","Cyanoacrylate skin microsealant for preventing surgical site infection after vascular surgery: a discontinued randomized clinical trial / Vierhout B.P. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2014 - Vol.: 15(4) p.: 425-30","A randomized trial of a skin sealant to reduce the risk of incision contamination in cardiac surgery / von Eckardstein A.S. [et al.] // Ann. Thorac. Surg. - 2011 Vol.: 92(2) p.: 632-7","Roy P. Serious adverse events after microbial sealant application in paediatric patients / Roy P., Loubiere A., Vaillant T., Edouard B. // Ann Pharm Fr. - 2014 - Vol.: 72(6) p.: 409-14","Cyanoacrylate microbial sealants for skin preparation prior to surgery / Lipp A. [et al.] // Cochrane Database Syst. Rev. - 2013 Vol: 8:CD008062","WHO guidelines on hand hygiene in health care. Geneva: World Health Organization - 2009 - URL: http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/44102/1/9789241597906_eng.pdf (accessed 24 July 2016)","Clusterrandomized, crossover trial of the efficacy of plain soap and water versus alcohol-based rub for surgical hand preparation in a rural hospital in Kenya. Nthumba P.M. [ et al.] // Br. J. Surg. - 2010 - Vol.: (11) p.:1621-8","Alcohol-based hand-rub versus traditional surgical scrub and the risk of surgical site infection: a randomized controlled equivalent trial / Al-Naami M.Y. [et al.]// EWMA J. - 2009 - Vol.: 9(3) p.:5-10","Weight C.J. Avagard hand antisepsis vs. traditional scrub in 3600 pediatric urologic procedures / Weight C.J., Lee M.C., Palmer J.S// Urology - 2010 - Vol.: 76(1) p.:15-7","Clinical implementation of a scrubless chlorhexidine/ethanol pre-operative surgical handrub / Marchand R. [ et al.] // Can. Oper. Room. Nurs. J. - 2008 - Vol.: 26(2) p.:21-2, 6, 9-2231","Value of hand disinfection by rubbing with alcohol prior to surgery in a tropical setting / Adjoussou S. [et al.] // Med. Trop. - 2009 - Vol.:69(5) p.: 463-6","Mainous M.R. Nutrition and infection / Mainous M.R., Deitch E.A. // Surg Clin North Am. -1994 - Vol.:74(3) p.: 659-76","Culebras J.M. Malnutrition in the twenty-first century: an epidemic affecting surgical outcome. / Culebras J.M. // Surg. Infect (Larchmt) - 2013 Vol.: 14(3) p.: 237-43","Waitzberg D.L., Ravacci G.R., Raslan M. Hospital hyponutrition / Waitzberg D.L., Ravacci G.R., Raslan M. // Nutr Hosp. - 2011 Vol.: 26(2) p.: 254-64","Studley H.O. Percentage of weight loss: a basic indicator of surgical risk in patients with chronic peptic ulcer. 1936. / Studley H.O.// Nutr. Hosp. - 2001 Vol.: 16(4) p.:141-3; discussion 0-1","Nutrition in the surgical patient: immunonutrition / Culebras-Fernandez J.M. [et al.] // Nutr Hosp. - 2001 Vol.: 16(3) p.: 67-77","Fry D.E. Fifty ways to cause surgical site infections. Surg. Infect. / Fry D.E. // Larchmt. - 2011 - Vol.: 12(6) p.:497-500","Di Carlo V. Complications of pancreatic surgery and the role of perioperative nutrition. [et al.] // Dig. Surg. - 1999. - Vol.: 16(4) p.: 320-6","Mazaki T., Ishii Y., Murai I. Immunoenhancing enteral and parenteral nutrition for gastrointestinal surgery: a multiple-treatments metaanalysis. / Mazaki T., Ishii Y., Murai I. // Ann. Surg. - 2015 - Vol.: 261(4) p.: 662-9","The impact of perioperative glutamine-supplemented parenteral nutrition on outcomes of patients undergoing abdominal surgery: a meta-analysis of randomized clinical trials / Yue C. [et al.]// Am. Surg. - 2013. - Vol.: 79(5) p.: 506-13","The role of immunonutrition in gynecologic oncologic surgery / Celik J.B. [et al.] // Europ. J. Gynaecol. Oncol. - 2009 - Vol.: 30(4) p.: 418-21","Reduced infections with perioperative immunonutrition in head and neck cancer: exploratory results of a multicenter, prospective, randomized, doubleblind study /Falewee M.N. [et al.] // Clin. Nutr. - 2014 - Vol.: 33(5) p.: 776-84","Prospective randomized trial of preoperative enteral immunonutrition followed by elective total gastrectomy for gastric cancer / Fujitani K. [et al.] // Br. J. Surg. - 2012 - Vol.: 99(5) p.: 621-9","The immunomodulating enteral nutrition in malnourished surgical patients - a prospective, randomized, double-blind clinical trial / Klek S. [et al.] // Clin. Nutr. - 2011 - Vol.: 30(3) p.: 282-8","Effect of preoperative oral immuneenhancing nutritional supplement on patients at high risk of infection after cardiac surgery: a random- ised placebo-controlled trial. / Tepaske R. [et al.] // Lancet. - 2001 - Vol.: 358(9283) p.: 696-701","Immunoenhanced enteral nutrition formulas in head and neck cancer surgery: a prospective, randomized clinical trial / Casas-Rodera P. [et al.] // Nutr. Hosp. - 2008 - Vol.: 23(2) p.: 105-10","Randomized clinical trial with an enteral arginine-enhanced formula in early postsurgical head and neck cancer patients / de Luis D.A. [et al.] // Europ. J. Clin. Nutr. - 2004 - Vol.: 58(11) p.: 1505-8","High dose of arginine enhanced enteral nutrition in postsurgical head and neck cancer patients. A randomized clinical trial. / De Luis DA. [et al.] // Europ. Rev. Med. Pharmacol. Sci. - 2009 - Vol.: 13(4) p.: 279-83","Effects of branched-chain amino acids-enriched nutrient support for patients undergoing liver resection for hepatocellular carcinoma / Okabayashi T. [et al.]// J. Gastroenterol Hepatol. - 2008 - Vol.: 23(12) p.: 1869-73","Berthold E. Continuation of TNF blockade in patients with inflammatory rheumatic disease. An observational study on surgical site infections in 1,596 elective orthopedic and hand surgery procedures / Berthold E., Geborek P., Gulfe A.// Acta Orthop. - 2013 - Vol.: 84(5) p.: 495-501","Immunosuppressive therapy does not increase operative morbidity in patients with Crohn's disease / Bafford AC [et al.] // J. Clin. Gastroenterol. - 2013 - Vol.:47(6) p.: 491-5","Strategies to prevent surgical site infectionsion acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. - 2014 - 35(6) p.: 605-27","Effects of supplemental oxygen and dexamethasone on surgical site infection: a factorial randomized trial double dagger / Kurz A. [et al.] // Br. J. Anaesth. -2015 - Vol.: 115(3) p.: 434-43","The role of oxygen in wound healing: a review of the literature. / Rodriguez P.G. [et al.] // Dermatol Surg. - 2008 - Vol.: 34(9) p.: 1159-69","Wound hypoxia and acidosis limit neutrophil bacterial killing mechanisms / Allen D.B. [et al.]// Arch Surg. - 1997 - Vol.: 132(9) p.: 991-6","Hays R.C. PO2, pH, and redox potential of experimental abscesses / Hays R.C., Mandell G.L. // Proc. Soc. Exper. Biol. Medic. Soc. - 1974 - vol.: 147(1) p.: 29-30","Improving surgical site infection prevention practices through a multifaceted educational intervention /Owens P. [et al.] // Ir. Med J. - 2015 - Vol.: 108(3) p.: 78-81","Guidelines: Prevention and treatment of surgical site infection: Summary of NICE guidance. / Leaper D. [et al.] // BMJ. - 2008 - Vol.: 337(7677) p.: 1049-51","Strategies to prevent surgical site infections in acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. - 2014 - Vol.: 35(06) p.: 605-27","Increased long-term mortality after a high perioperative inspiratory oxygen fraction during abdominal surgery: follow-up of a randomized clinical trial / Meyhoff C.S [et al.] // Anesth. Analg. - 2012 - Vol.: 115(4) p.: 849-54","Avoidance of nitrous oxidefor patients undergoing major surgery: a randomized controlled trial. / Myles P.S. [et al.] // Anesthesiology. - 2007 - Vol.: 107(2) p.: 221-31","Hall J.E. Textbook of medical physiology. 12th edition. / Hall J.E., Guyton A.C., editors. // London: Elsevier Saunders; - 2011","Sessler D.I. Mild perioperative hypothermia. / Sessler D.I. // New Engl. J. Med. - 1997 - Vol.: 336(24) p.: 1730-7","Sessler D.I. Physiologic responses to mild perianesthetic hypothermia in humans. / Sessler D.I., Rubinstein E.H., Moayeri A. // Anesthesiology. - 1991 - Vol.: 75(4) p.: 594-610","The effects of mild perioperative hypothermia on blood loss and transfusion requirement. / Rajagopalan S. [et al.] // Anesthesiology. - 2008 - Vol.: 108(1) p.: 71-7","Mild hypothermia alters propofol Pharm acokinetics and increases the duration of action of atracurium. / Leslie K. [et al.] // Anesthes Analg. - 1995 - Vol.: 80(5) p.: 1007-14","The effects of local warming on surgical site infection / Whitney J.D. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2015 - Vol.: 16(5) p.: 595-603","Torossian A. Thermal management during anaesthesia and thermoregulation standards for the prevention of inadvertent perioperative hypothermia. / Torossian A. // Best Pract. Res Clin. Anaesthesiol. - 2008 - Vol.: 22(4) p.: 659-68","Kurz A. Perioperative normothermia to reduce the incidence of surgical-wound infection and shorten hospitalization. Study of Wound Infection and Temperature Group. Kurz A., Sessler D.I., Lenhardt R. New Engl. J. Med. - 1996 - Vol.: 334(19) p.: 1209-15","Effects of preoperative warming on the incidence of wound infection after clean surgery: a randomised controlled trial. / Melling A.C. [et al.] // Lancet. - 2001 Vol.: 358(9285) p.: 876-80","Perioperative cost-finding analysis of the routine use of intraoperative forced-air warming during general anesthesia. / Fleisher L.A. [et al.] // Anesthesiology. - 1998 Vol.: 88(5) p.: 1357-64","Mahoney C.B. Maintaining intraoperative normothermia: a metaanalysis of outcomes with costs. / Mahoney C.B., Odom J. // AANA J. - 1999 - Vol.: 67(2) p.: 155-63","Berry D. A clinical evaluation of the cost and time effectiveness of the ASPAN hypothermia guideline. / Berry D., Wick C., Magons P. // J. Perianesthes Nurs. - 2008 - Vol.: 23(1) p.: 24-35","Postoperative hyperglycemia and surgical site infection in general surgery patients /Ata A. [et al.] // Arch. Surg. - 2010 - Vol.: 145(9) p.: 858-64","Kao L.S. Glycemic control and prevention of surgical site infection. / Kao L.S., Phatak U.R. // Surg. Infect. (Larchmt). - 2013 - Vol.: 14(5) p.: 437-44","Perioperative hyperglycemia and risk of adverse events among patients with and without diabetes. /Kotagal M. [et al.] // Ann Surg. - 2015 - Vol.: 261(1) p.: 97-103","Stress hyperglycemia and surgical site infection in stable nondiabetic adults with orthopedic injuries / Richards J.E. [ et al.] // J. Trauma Acute Care Surg. - 2014 Vol.: 76(4) p.: 1070-5","Emam I.A. [et al.] //Our experience of controlling diabetes in the perioperative period of patients who underwent cardiac surgery. Diabetes Res. Clin. Pract. - 2010 - Vol.: 88(3) p.: 242-6","Does continuous insulin therapy reduce postoperative supraventricular tachycardia incidence after coronary artery bypass operations in diabetic patients? / Kirdemir P. [et al.] // J. Cardiothorac. Vasc. Anesth. - 2008 - Vol.: 22(3) p.: 383-7","Intensive versus conventional glycemic control in patients with diabetes during enteral nutrition after gastrectomy / Yuan J. [et al.] // J. Gastrointest. Surg. - 2015 19(8):1553-8","Effects of intravenous fluid restriction on postoperative complications: comparison of two perioperative fluid regimens: a randomized assessor-blinded multicenter trial. / Brandstrup B. [et al.] // Ann. Surg. - 2003 - Vol.: 238(5) p.: 641-8","Supplemental intravenous crystalloid administration does not reduce the risk of surgical wound infection. / Kabon B. [et al.] // Anesth Analg. - 2005 - Vol.: 101(5) p.: 1546-53","Randomised controlled trial assessing the impact of a nurse delivered, flow monitored protocol for optimisation of circulatory status after cardiac surgery / McKendry M. [et al.] // BMJ. 2004 - Vol.: 329(7460) p.: 258","Early goal-directed therapy after major surgery reduces complications and duration of hospital stay. A randomised, controlled trial [ISRCTN38797445]. / Pearse R. [et al.] // Crit Care. - 2005 - Vol.: 9(6) p.: R687-93","Intravenous fluid restriction after major abdominal surgery: a randomized blinded clinical trial. / Vermeulen H. [et al.] // Trials. - 2009 - Vol.: 10 p.: 50","Effect of intraoperative fluid management on outcome after intraabdominal surgery. / Nisanevich V. [et al.] // Anesthesiology. 2005 - Vol.: 103(1) p.:25-32","Ring drape do not protect against surgical site infections in colorectal surgery: a randomised controlled study / Baier P. [et al.] // Int. J. Colorectal. Dis. - 2012 Vol.: 27(9) p.: 1223-8","Multicenter double-blinded randomized controlled trial of standard abdominal wound edge protection with surgical dressings versus coverage with a sterile circular polyethylene drape for prevention of surgical site infections: a CHIRNet trial (BaFO; NCT01181206). /Mihaljevic A.L. [et al.]// Ann Surg. - 2014 - Vol.: 260(5) p.: 730-7; discussion 7-9","Impact of wound edge protection devices on surgical site infection after laparotomy: multicentre randomised controlled trial (ROSSINI Trial). / Pinkney T.D. [et al.] // BMJ. - 2013 - Vol.: 347 p.: f4305","Use of an impervious wound-edge protector to reduce the postoperative wound infection rate / Redmond H.P. [et al.] // Br. J. Surg. - 1994 - Vol.: 81(1811)","ALEXIS O-Ring wound retractor vs conventional wound protection for the prevention of surgical site infections in colorectal resections (1). / Cheng K.P. [et al.] // Colorectal Dis. - 2012 - Vol.: 14(6) p.: e346-51","Barrier wound protection decreases surgical site infection in open elective colorectal surgery: a randomized clinical trial. /Reid K. [et al.] // Dis Colon Rectum. - 2010 - Vol.: 53(10) p.: 1374-80","A prospective randomized study for evaluation of wound retractors in the prevention of incision site infections after cesarean section. / Theodoridis T.D. [et al.] // Clin Exper Obstet Gynecol. - 2011 - Vol.: 38(1) p.:57-9","Efficacy of dilute betadine solution irrigation in the prevention of postoperative infection of spinal surgery. / Cheng M.T. [et al.] // Spine. - 2005 - Vol.: 30(15) p.:1689-93","Can povidoneiodine solution be used safely in a spinal surgery? / Chang F.Y. [et al.] // Europ. Spine J. - 2006 - Vol.: 15(6) p.:1005-14","Rogers D.M. Povidoneiodine wound irrigation and wound sepsis. / Rogers D.M., Blouin G.S., O'Leary J.P. // Surg. Gynecol. Obstet. - 1983 - Vol.: 157(5) p.: 426-30","Combined topical povidone-iodine and systemic antibiotics in postappendicectomy wound sepsis. / Lau W.Y. [et al.] // Br. J. Surg. - 1986 - Vol.: 73(12) p.: 958-60","Intra-operative peritoneal lavage--who does it and why? /Whiteside O.J. [et al.] // Ann. R. Col. Surg. Engl. - 2005 - Vol.: 87(4) p.: 255-8","Measures to prevent surgical site infections: what surgeons (should) do. / Diana M. [et al.] // World J. Surg. - 2011 - Vol.: 35(2) p.: 280-8","Survey of intraoperative povidoneiodine application to prevent surgical site infection in a French region. / Pivot D. [et al.] // J. Hosp. Infection. - 2011 - Vol.: 77(4):363-4","Strategies to prevent surgical site infections in acute care hospitals: 2014 update. / Anderson D.J. [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2014 - Vol.: 35(6) p.: 605-27","Toxic effects of wound irrigation solutions on cultured tibiae and osteoblasts. / Kaysinger K.K. [et al.] // J. Orthop Trauma. - 1995 - Vol.: 9(4) p.: 303-11","Cellular and bacterial toxicities of topical antimicrobials. / Lineaweaver W. [et al.] // Plast. Reconstr. Surg. - 1985 - Vol.: 75(3) p.: 394-6","lister formation with negative pressure dressings after total knee arthroplasty. /Howell R.D. [et al.] // Curr. Orthop. Pract. - 2011 - Vol.: 22(2) p.: 176-9","Negative pressure wound therapy after severe open fractures: a prospective randomized study. / Stannard J.P. [et al.] // J. Orthop. Trauma. - 2009 - Vol.: 23(8) p.: 552-7","Negative pressure wound therapy for critically ill adults with open abdominal wounds: a systematic review. / Roberts D.J. [et al.] // J. Trauma Acute Care Surg. - 2012 - Vol.: 73(3) p.: 629-39","Prophylactic use of negative pressure wound therapy after cesarean delivery. / Echebiri N.C. [et al.] // Obstet. Gynecol. - 2015 - Vol.: 125(2) p.: 299-307","Cost of care using prophylactic negative pressure wound vacuum on closed laparotomy incisions. / Lewis L.S. [et al.] // GynecolOncol. - 2014 - Vol.: 132(3) p.: 684-9","ost-utility analysis of negative pressure wound therapy in high-risk cesarean section wounds. / Tuffaha H.W. [et al.] // J. Surg. Res. - 2015 - Vol.:195(2) p.: 612-22","Tanner J. Double gloving to reduce surgical cross-infection. / Tanner J, Parkinson H. // Cochrane Database Syst. Rev. - 2009 - Vol.: (4)","Influence of rescrubbing before laparotomy closure on abdominal wound infection after colorectal cancer surgery: results of a multicenter randomized clinical trial. / Ortiz H. [et al.] // Arch Surg. - 2012 - Vol.: 147(7) p.: 614-20","Surgical site infection rates following implementation of a colorectal closure bundle in elective colorectal surgeries. / Ghuman A. [et al.] // Dis. Colon Rectum. - 2015 - Vol.: 58(11) p.: 1078-82","The effect of triclosan-coated sutures in wound healing. A double blind randomised prospectivepilot study. / Deliaert A.E. [et al.] // J. Plast. Reconstr Aesth Surg. - 2009 - Vol.: 62(6) p.: 771-3","ussell A.D. Whither triclosan? / Russell A.D. // J. Antimicrob. Chemother. - 2004 - Vol.: 53(5) p.: 693-5","Molecular basis of triclosan activity. / Levy C.W. [et al.] // Nature. - 1999 - vol.: 398(6726) p.: 383-4","McMurry L.M. Triclosan targets lipid synthesis. / McMurry L.M., Oethinger M., Levy S.B. // Nature. - 1998 - vol.: 394(6693) p.: 531-2. 115.Study of the efficacy of coated Vicryl plus antibacterial suture in an animal model of orthopedic surgery. / Marco F. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). 2007; - Vol.: 8(3) p.: 359-65","In vitro antimicrobial evaluation of coated VICRYL* Plus antibacterial suture (coated polyglactin 910 with triclosan) using zone of inhibition assays. / Rothenburger S. [et al.] // Surg. Infect. (Larchmt). - 2002 - Vol.: 3(Suppl. 1) p.: 79-87","Storch M.L., Rothenburger S.J., Jacinto G. Experimental efficacy study of coated VICRYL plus antibacterial suture in guinea pigs challenged with Staphylococcus aureus. / Storch M.L., Rothenburger S.J., Jacinto G. // Surg. Infect. (Larchmt). - 2004 - Vol.: 5(3) p.: 281-8","New anti-infective coatings of surgical sutures based on a combination of antiseptics and fatty acids. / Matl F.D. [et al.] // J. Biomat. Sci. - 2009 Vol.: 20(10) p.: 1439-49","Novel high efficient coatings for anti-microbial surgical sutures using chlorhexidine in fatty acid slow-release carrier systems. / Obermeier A. [et al.] // PloS One. - 2014 - Vol.: 9(7) p.: e101426","Galal I. Impact of using triclosan-antibacterial sutures on incidence of surgical site infection. / Galal I., El-Hindawy K. // Am. J. Surg. - 2011 - Vol.: 202(2) p.: 133-8","Triclosan-coated sutures reduce the incidence of wound infections and the costs after colorectal surgery: a randomized controlled trial. / Nakamura T. [et al.] // Surgery. - 2013 - Vol.: 153(4) p.: 576-83","Triclosan-coated sutures for the reduction of sternal wound infections: economic considerations. / Fleck T. [et al.] // Ann. Thorac. Surg. - 2007 - Vol.: 84(1) p.: 232-6","Prospective randomised comparison of single-dose versus multiple-dose cefuroxime for prophylaxis in coronary artery bypass grafting. / Nooyen S.M. [et al.] // Europ. J. Clin. Microbio.l Infect. Dis. - 1994 - Vol.: 13(12) p.: 1033-7","omparative study of single-dose and 24-hour multiple-dose antibiotic prophylaxis for cardiac surgery. / Tamayo E. [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2008 - Vol.: 136(6) p.: 1522-7","Single-dose versus single-day antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery: a prospective, randomized, double-blind clinical study. / Danda A.K. [et al.] // J. Oral Maxillofac. Surg. - 2010 - Vol.: 68(2) p.: 344-6","Antibiotic prophylaxis for bilateral sagittal split osteotomies: a randomized, double-blind clinical study. / Wahab P.U.A. [et al.] // Int. J. Oral Maxillofac. Surg. - 2013 - Vol.: 42(3) p.: 352-5","Prospective randomized study of efficacy of 1-day versus 3-day antibiotic prophylaxis for preventing surgical site infection after coronary artery bypass graft. / Lin M.H. [et al.] // J. Form Med. Assoc. - 2011 - Vol.: 110(10) p.: 619-26","Antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery: a prospective, randomised clinical trial. / Baqain Z.H. [et al.] // The Br. J. Oral. Maxillofac. Surg. - 2004 - Vol.: 42(6) p.: 506-10","Value of prophylactic postoperative antibiotic therapy after bimaxillary orthognathic surgery: A clinical trial. / Eshghpour M. [et al.] // Iran J. Otorhinolaryngol. - 2014 - Vol.: 26(77) p.: 207-10","Fridrich K.L. Prospective analysis of antibiotic prophylaxis for orthognathic surgery. / Fridrich K.L., Partnoy B.E., Zeitler D.L. // Int. J. Adult Orthodon. Orthognath. Surg. 1994;9(2):129-31","Dickinson Jennings C. A prospective, randomized controlled trial comparing 3 dressing types following sternotomy. Dickinson Jennings C., Culver Clark R., Baker J.W. Ostomy Wound Manage. - 2015 - Vol.: 61(5) p.: 42-9","Vogt K.C. Moist wound healing compared with standard care of treatment of primary closed vascular surgical wounds: a prospective randomized controlled study. / Vogt K.C., Uhlyarik M., Schroeder T.V. // Wound Repair Regen. - 2007 - Vol.: 15(5) p.: 624-7","ffect of three wound dressings on infection, healing comfort, and cost in patients with sternotomy wounds: a randomized trial. /Wynne R. [et al.] // Chest. - 2004 - Vol.: 125(1) p.: 43-9","Michie D.D. Influence of occlusive and impregnated gauze dressings on incisional healing: a prospective, randomized, controlled study. / Michie D.D., Hugill J.V. // Ann. Plast. Surg. - 1994 - Vol.: 32(1) p.: 57-64","Galandiuk S. Postoperative irrigation-suction drainage after pelvic colonic surgery. A prospective randomized trial. Galandiuk S., Fazio V.W. Dis Colon Rectum. - 1991 - Vol.: 34(3) p.: 223-8","andomized trial of drainage of colorectal anastomosis. / Sagar P.M. [et al.] // Br. J. Surg. - 1993 - Vol.: 80(6) p.: 769-71","erliner S.D., Burson L.C., Lear P.E. Use and a buse of intraperitoneal drains in colon surgery. / Berliner S.D., Burson L.C., Lear P.E. // Arch Surg. -1964 - Vol.: 89 p.: 686-9","The effect of surgical drainage materials oncolonic healing. / Smith S.R. [et al.] // Br. J. Surg. - 1982 - Vol.: 69(3) p.:153-5"],"dc.date.accessioned_dt":"2021-01-14T11:50:57Z","dc.date.accessioned":["2021-01-14T11:50:57Z"],"dc.date.available":["2021-01-14T11:50:57Z"],"dateIssued":["2018-01-01"],"dateIssued_keyword":["2018-01-01","2018"],"dateIssued_ac":["2018-01-01\n|||\n2018-01-01","2018"],"dateIssued.year":[2018],"dateIssued.year_sort":"2018","dc.date.issued_dt":"2018-01-01T00:00:00Z","dc.date.issued":["2018-01-01"],"dc.date.issued_stored":["2018-01-01\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\n"],"dc.identifier.uri":["http://hdl.handle.net/123456789/5237"],"dc.issue.number":["3"],"dc.issue.volume":["13"],"dc.origin":["https://medvestb.elpub.ru/jour/article/view/302"],"dc.pages":["111-123"],"dc.publisher":["\"ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России\""],"dc.publisher.ru":["\"ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России\""],"dc.rights":["CC BY 4.0"],"dc.section":["ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ"],"dc.section.ru":["ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ"],"dc.source":["Bashkortostan Medical Journal","Медицинский вестник Башкортостана"],"dc.source.en":["Bashkortostan Medical Journal"],"dc.source.ru":["Медицинский вестник Башкортостана"],"subject":["инфекционные осложнения","хирургия","профилактика","infectious complications","surgery","prevention"],"subject_keyword":["инфекционные осложнения","инфекционные осложнения","хирургия","хирургия","профилактика","профилактика","infectious complications","infectious complications","surgery","surgery","prevention","prevention"],"subject_ac":["инфекционные осложнения\n|||\nинфекционные осложнения","хирургия\n|||\nхирургия","профилактика\n|||\nпрофилактика","infectious complications\n|||\ninfectious complications","surgery\n|||\nsurgery","prevention\n|||\nprevention"],"subject_tax_0_filter":["инфекционные осложнения\n|||\nинфекционные осложнения","хирургия\n|||\nхирургия","профилактика\n|||\nпрофилактика","infectious complications\n|||\ninfectious complications","surgery\n|||\nsurgery","prevention\n|||\nprevention"],"subject_filter":["инфекционные осложнения\n|||\nинфекционные осложнения","хирургия\n|||\nхирургия","профилактика\n|||\nпрофилактика","infectious complications\n|||\ninfectious complications","surgery\n|||\nsurgery","prevention\n|||\nprevention"],"dc.subject_mlt":["инфекционные осложнения","хирургия","профилактика","infectious complications","surgery","prevention"],"dc.subject":["инфекционные осложнения","хирургия","профилактика","infectious complications","surgery","prevention"],"dc.subject.ru":["инфекционные осложнения","хирургия","профилактика","infectious complications","surgery","prevention"],"title":["PREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II","ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ. ЧАСТЬ II"],"title_keyword":["PREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II","ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ. ЧАСТЬ II"],"title_ac":["prevention of infectious complications in surgery. part ii\n|||\nPREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II","профилактика инфекционных осложнений в хирургии. часть ii\n|||\nПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ. ЧАСТЬ II"],"dc.title_sort":"PREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II","dc.title_hl":["PREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II","ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ. ЧАСТЬ II"],"dc.title_mlt":["PREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II","ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ. ЧАСТЬ II"],"dc.title":["PREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II","ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ. ЧАСТЬ II"],"dc.title_stored":["PREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nen","ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ. ЧАСТЬ II\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nnull\n|||\nru"],"dc.title.en":["PREVENTION OF INFECTIOUS COMPLICATIONS IN SURGERY. PART II"],"dc.title.ru":["ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ. ЧАСТЬ II"],"publication_grp":["123456789/5237"],"bi_4_dis_filter":["инфекционные осложнения\n|||\nинфекционные осложнения","surgery\n|||\nsurgery","профилактика\n|||\nпрофилактика","prevention\n|||\nprevention","хирургия\n|||\nхирургия","infectious complications\n|||\ninfectious complications"],"bi_4_dis_partial":["хирургия","профилактика","инфекционные осложнения","prevention","infectious complications","surgery"],"bi_4_dis_value_filter":["хирургия","профилактика","инфекционные осложнения","prevention","infectious complications","surgery"],"bi_sort_1_sort":"prevention of infectious complications in surgery. part ii","bi_sort_2_sort":"2018","bi_sort_3_sort":"2021-01-14T11:50:57Z","read":["g0"],"_version_":1702614937269960704}]},"facet_counts":{"facet_queries":{},"facet_fields":{},"facet_dates":{},"facet_ranges":{},"facet_intervals":{}},"highlighting":{"2-5134":{"dc.description.abstract.ru_RU":[", прооперированных по мето ду Scarf и составил в среднем 86,0 баллов после операции. Austin- остеотомия привела к"],"dc.description.abstract":[", прооперированных по мето ду Scarf и составил в среднем 86,0 баллов после операции. Austin- остеотомия привела к"],"bi_4_dis_partial":["Austin osteotomy"],"dc.subject.en":["Austin osteotomy"],"dc.description.abstract_hl":[", прооперированных по мето ду Scarf и составил в среднем 86,0 баллов после операции. Austin- остеотомия привела к"],"dc.subject":["Austin osteotomy"],"dc.subject.ru_RU":["остеотомия по Austin"],"dc.subject_mlt":["Austin osteotomy"],"dc.abstract.en":[" and metatarsophalangeal joints (osteotomy of the first metatarsal bone by the method of Scarf, Austin, Bosch \nMagnan"],"subject":["Austin osteotomy"],"dc.abstract":[" and metatarsophalangeal joints (osteotomy of the first metatarsal bone by the method of Scarf, Austin, Bosch \nMagnan"]},"2-2480":{"dc.contributor.author_hl":["Carter, Austin"],"dc.contributor.author":["Carter, Austin"],"bi_2_dis_partial":["Carter, Austin"],"author":["Carter, Austin"],"dc.contributor.author_mlt":["Carter, Austin"]},"2-3539":{"dc.title.en":[" OF SEGMENTAL OSTEOTOMY"],"dc.title":[" OF SEGMENTAL OSTEOTOMY"],"dc.title_hl":[" OF SEGMENTAL OSTEOTOMY"],"dc.title_mlt":[" OF SEGMENTAL OSTEOTOMY"],"bi_4_dis_partial":["segmental osteotomy"],"dc.subject.en":["segmental osteotomy"],"title":[" OF SEGMENTAL OSTEOTOMY"],"dc.subject":["segmental osteotomy"],"dc.subject_mlt":["segmental osteotomy"],"dc.abstract.en":["  investigated in comparison with branded drugs Bio-Oss ® in vivo via the model of segmental osteotomy"],"subject":["segmental osteotomy"],"dc.abstract":["  investigated in comparison with branded drugs Bio-Oss ® in vivo via the model of segmental osteotomy"]},"2-5556":{"dc.abstract.en":[" she was diagnosed with Proteus syndrome. The operation was repeated – corrective osteotomy, ex cision"],"dc.abstract":[" she was diagnosed with Proteus syndrome. The operation was repeated – corrective osteotomy, ex cision"]},"2-8043":{"dc.citation.en":["Leti Acciaro A, Garagnani L, Lando M, Lana D, Sartini S, Adani R. Modified dome osteotomy"],"dc.citation.ru":["Leti Acciaro A, Garagnani L, Lando M, Lana D, Sartini S, Adani R. Modified dome osteotomy"],"dc.citation":["Leti Acciaro A, Garagnani L, Lando M, Lana D, Sartini S, Adani R. Modified dome osteotomy"]},"2-3461":{"dc.fullHTML":[" РНК и ее фракций набор MaxRecovery BiooPure RNA (Bio Scientific, Austin, TX, USA) не был выбран, так"],"dc.fullRISC.ru":[" изоляции тотальной РНК\nи ее фракций набор MaxRecovery BiooPure RNA (Bio\nScientific, Austin, TX, USA) не был"],"dc.fullHTML.ru":[" РНК и ее фракций набор MaxRecovery BiooPure RNA (Bio Scientific, Austin, TX, USA) не был выбран, так"],"dc.fullRISC":[" изоляции тотальной РНК\nи ее фракций набор MaxRecovery BiooPure RNA (Bio\nScientific, Austin, TX, USA) не был"]},"2-4332":{"dc.citation.en":["Antibiotic prophylaxis for bilateral sagittal split osteotomies: a randomized, double"],"dc.citation.ru":["Antibiotic prophylaxis for bilateral sagittal split osteotomies: a randomized, double"],"dc.citation":["Antibiotic prophylaxis for bilateral sagittal split osteotomies: a randomized, double"]}}} -->