Статья
Методика выделения и культивации эпителиоцитов из почки кролика
Т. И. Биккузин,
Р. Р. Язгарова,
А. В. Михайлова,
Ш. Р. Рахматуллин,
Д. И. Халилов
2025
Кубический эпителий почки является незаменимой и распространенной моделью in vitro для изучения физиологии клеток млекопитающих. Данные клетки играют ключевую роль в фильтрации крови, реабсорбции питательных веществ и выведении отходов, поэтому их поведение напрямую влияет на функции почек. Использование почечных эпителиоцитов в исследованиях позволяет изучать патологические процессы на клеточном уровне, например влияние токсинов, лекарств или генетических мутаций на функции почек.Цель работы – получить первичную линию эпителиоцитов из почки кролика.Материал и методы. Первичные клетки выделялись посредством диссоциации ткани в коллагеназе 1-го типа с последующим культивированием в среде, обогащённой факторами роста: человеческий инсулин, трансферрин, дексаметазон и эпидермальный фактор роста. Полученная субкультура клеток верифицировалась иммуцитохимическим методом. В качестве тканеспецифических маркеров кубического эпителия почки были выбраны: Anti-alpha 1 Sodium Potassium ATPase и Ncadherin, в качестве отрицательного контроля – маркер гладкомышечных клеток и фибробластов alpha-SMA. Фермент Na+/K+-АТФаза играет важную роль в фильтрации крови и выведении токсинов из почек млекопитающих. N-cadherin – белок, который участвует в образовании плотных контактов эпителиальных тканей.Результаты. Выделенные из ткани клетки активно пролиферировали в специализированной культуральной среде и демонстрировали морфологические характеристики, свойственные для эпителиального фенотипа. Результаты иммунофлуоресцентной микроскопии подтвердили эпителиальное происхождение клеток. В итоге была получена первичная стабильная линия почечного эпителия почки кролика, пригодная для дальнейших экспериментальных работ in vitro.
Биккузин Т. И., Язгарова Р. Р., Михайлова А. В., Рахматуллин Ш. Р., Халилов Д. И. Методика выделения и культивации эпителиоцитов из почки кролика. Медицинский вестник Башкортостана. 2025;20(1):66-71.
Цитирование
Список литературы
1. A simple method for the isolation and detailed characterization of primary human proximal tubule cells for renal replacement therapy / N. Sánchez-Romero [et al.] // Int J Artif Organs. – 2020. – Vol. 43. – №1. – P. 45-57. doi: 10.1177/0391398819866458.
2. Anatomical relationship between the collecting system and the intrarenal arteries in the rabbit: contribution for an experimental model / A. Shalgum [et al.] // Anat Histol Embryol. – 2012. – Vol. 41. – №2. – P.130-138. doi: 10.1111/j.1439-0264.2011.01112.x.
3. Barron, E.T. Primary cultures of rat and rabbit renal proximal epithelium as models for nephrotoxicity investigations / E.T. Barron, A. O'Brien, M.P. Ryan // Toxicol Lett. – 1990. – Vol. 53 – №1. – P. 161-165. doi: 10.1016/0378-4274(90)90115-3.
4. Clausen, M.V. The Structure and Function of the Na,K-ATPase Isoforms in Health and Disease / M.V. Clausen, F. Hilbers, H. Poulsen // Front. Physiol. – 2017. – Vol. 8. – P. 1-16. doi: 10.3389/fphys.2017.00371
5. Distinct Mesenchymal Alterations in N-Cadherin and E-Cadherin Positive Primary Renal Epithelial Cells / C. Keller [et al.] // PLOS ONE. – 2012. – Vol. 7. – №8. – P. 1-15. doi.: 10.1371/journal.pone.0043584.
6. Flow cytometric isolation of primary murine type II alveolar epithelial cells for functional and molecular studies / M. Gereke [et al.] //Journal of visualized experiments: JoVE. – 2012. – №. 70. – P. 1-7. doi: 10.3791/4322
7. Freshney R. I. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications / R. I. Freshney – John Wiley & Sons, 2018 – 186 p.
8. Guyton A.C., Hall J.E. Textbook of Medical Physiology. 14th ed. Philadelphia / A.C. Guyton, J.E. Hall - PA: Saunders: Elsevier, 2021. – 321 p.
9. N-cadherin is depleted from proximal tubules in experimental and human acute kidney injury / J. Nürnberger [et al.] // Histochem Cell Biol. – 2010. – Vol. 133. – №.6. – P. 641-649. doi: 10.1007/s00418-010-0702-1.
10. Taub, M. Primary kidney proximal tubule cells / M. Taub // Methods Mol Biol. – 2005. – Vol. 290. – P. 231-247. doi: https://doi.org/10.1385/1-59259-838-2:231
11. The expression of cytoskeletal proteins (α-SMA, vimentin, desmin) in kidney tissue: A comparison of fetal, normal kidneys, and glomerulonephritis / G. Gonlusen [et al.] // Int Urol Nephrol. – 2001. – Vol. 33. – №2. – P. 299-305. doi: 10.1023/A:1015226426000
12. The interstitial expression of alpha-smooth muscle actin in glomerulonephritis is associated with renal function / Z. S. Novakovic [et al.] // Med Sci Monit. – 2012. – Vol. 18. – №.4. – P. 236-240. doi.: 10.12659/MSM.882623
13. The wide utility of rabbits as models of human diseases / P. J. Esteves [et al.] // Exp Mol Med. – 2018. – Vol. 50. – № 5. – P.1-10. doi: 10.1038/s12276-018-0094-1.
14. Tissue culture of human kidney epithelial cells of proximal tubule origin / C. J. Detrisac [et al.] // Kidney Int. – 1984. – Vol. 25. – №.2. – P. 383-90. doi: 10.1038/ki.1984.28. PMID: 6727133.
Похожие публикации
